蒋素华，黄 萍，王默霏，梁 芳，许申平，崔 波

(1.郑州师范学院 生物工程研究所，河南 郑州 450044； 2.河南农业职业学院，河南 郑州 451450)

萼脊兰MADS-box基因的克隆及表达载体构建

蒋素华1，黄 萍2，王默霏1，梁 芳1，许申平1，崔 波1

(1.郑州师范学院 生物工程研究所，河南 郑州 450044； 2.河南农业职业学院，河南 郑州 451450)

为了研究“ABC”模型的B类PI基因，探究决定花瓣和雄蕊形成的基因特征。采用CTAB法提取萼脊兰花瓣总RNA，并通过RT-PCR法克隆萼脊兰PI基因的编码序列，该序列长度为633 bp，编码210个氨基酸，与小兰屿蝴蝶兰的氨基酸相似性最高。对PI所表达蛋白质的结构、亲水性和二级结构进行了分析，结果显示，该基因包含MADS-box和K-box保守结构域，属于MADS-box基因家族；该蛋白分子属于亲水性蛋白，包含56.19% α螺旋、13.81% 的延伸链以及30%的不规则折叠，实时荧光定量PCR结果显示，PI基因主要在花器官中表达，且表达量高，说明PI基因的表达具有组织特异性。构建植物表达载体的结果显示，目的基因和带启动子的片段已插入到表达载体pCAMBIA1301中，表明成功构建植物表达载体1301-PI，为最终获得新奇花型的萼脊兰奠定基础。

萼脊兰；PI基因；克隆；表达分析；表达载体

萼脊兰(Sedireajaponica)属单子叶植物兰科萼脊兰属，花瓣长圆状舌形，具橘子香气，具有较高的园艺价值以及一定的药用价值，养护简单且观赏期长，因而越来越受到人们的关注和喜爱[1-3]。花发育是高等植物生长发育过程中极为重要的环节，花的分化从生殖生长开始，即营养分生组织分化为花序分生组织，进而分化为花分生组织形成花器官原基，最终形成花器官[4-6]。……