喻文娟，俞菊华，，李红霞，李建林，唐永凯，于 凡 ，何 枫，傅纯洁

(1．南京农业大学 无锡渔业学院，江苏 无锡 214081；2.中国水产科学研究院 淡水渔业研究中心,农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室，江苏 无锡 214081；3.东海县水产技术推广站，江苏 东海 222300)

鲤鱼2种脂酰辅酶A脱氢酶基因cDNA克隆、表达及活性研究

喻文娟1，俞菊华1，2，李红霞2，李建林2，唐永凯2，于 凡2，何 枫1，傅纯洁3

(1．南京农业大学 无锡渔业学院，江苏 无锡 214081；2.中国水产科学研究院 淡水渔业研究中心,农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室，江苏 无锡 214081；3.东海县水产技术推广站，江苏 东海 222300)

为探究脂酰辅酶A脱氢酶对脂肪酸β氧化的调控机制，使用RT-PCR 在鲤鱼肝脏克隆了脂酰辅酶A脱氢酶家族中的MCAD和LCAD全长cDNA序列，阅读框分别为1 275，1 326 bp，编码424,441个氨基酸，分析表明他们均具备ACADs家族的特征序列：FAD结合位点、底物结合位点、催化位点等，与斑马鱼MCAD和LCAD的一致性分别为93.16%和94.56%。实时定量RT-PCR结果表明，MCAD和LCAD主要在肝脏和心脏表达；不同脂肪源对MCAD的表达没有明显影响，但鱼油对LCAD的表达有明显的刺激作用。此外，构建了原核表达载体MCADs-pEASY(E2)和LCADs-pEASY(E2)，经IPTG诱导获得了原核表达蛋白，分子量分别为43.0，43.6 kDa。经检测这2个蛋白在370，450 nm处有明显的吸收峰，表明他们能自然结合FAD辅基。吩嗪硫酸甲酯反应法结果表明：MCAD和LCAD酶活性最适温度均为28 ℃，酶活分别为9.12，10.29 U/g。结果表明，与哺乳动物类似，鲤鱼MCAD和LCAD在肝脏和心脏表达量高；高不饱和脂肪酸对LCAD的表达有促进作用。

鲤鱼；MCAD；LCAD；克隆；原核表达；……