谢立兰，安 康，陈 力，孙紫德，方六荣

( 1.武汉生物工程学院 应用生物技术研究中心，湖北 武汉 430415；2.湖北省病毒载体工程技术研究中心，湖北 武汉 430415；3.河北北方学院 医学检验学院，河北 张家口 075000；4.华中农业大学 农业微生物学国家重点实验室，湖北 武汉 430070)

猪DDX21基因的克隆、序列分析及原核表达

谢立兰1，2，安 康3，陈 力1，2，孙紫德1，2，方六荣4

( 1.武汉生物工程学院 应用生物技术研究中心，湖北 武汉 430415；2.湖北省病毒载体工程技术研究中心，湖北 武汉 430415；3.河北北方学院 医学检验学院，河北 张家口 075000；4.华中农业大学 农业微生物学国家重点实验室，湖北 武汉 430070)

DEAD-box解旋酶21(DExD-box helicase 21， DDX21)是含DEAD-box的RNA解旋酶家族成员之一，不仅参与RNA的合成和加工过程，同时还参与机体的天然免疫应答，调控病毒的复制。为了研究猪DDX21基因的结构和功能，以猪肾传代细胞(PK-15)总cDNA为模板，根据GenBank 公布的预测序列(XM_005657387.2)设计引物扩增猪源DDX21基因，并采用分子生物学软件将其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示，首次成功克隆了猪DDX21基因的cDNA序列(GenBank登录号为KX396051)，其开放读码框全长为2 355 bp，编码784个氨基酸；与牛、斑马鱼、人、小鼠、大鼠和非洲爪蟾的氨基酸序列同源性分别为91.7%，57.5%，88.0%，82.3%，83.8%和48.9%；该基因编码的蛋白结构域和人、牛、小鼠、大鼠一样，其C端都具有保守的GUCT结构域；系统进化树分析表明猪DDX21与牛DDX21的亲缘关系最近。进一步构建原核表达质粒pET28a-DDX21，经测序鉴定正确后，将其转化感受态细胞BL21(DE3)，对DDX21基因进行原核表达。经 SDS-PAGE 分析显示重组菌可表达分子量约为 90 kDa的融合蛋白，与预期相符；……