丁 红，戴良香，秦斐斐，慈敦伟，宋文武，张智猛

(山东省花生研究所，山东 青岛 266100)

花生膜联蛋白基因AhAnn1的克隆与表达分析

丁 红，戴良香，秦斐斐，慈敦伟，宋文武，张智猛

(山东省花生研究所，山东 青岛 266100)

为挖掘花生抗逆境胁迫相关基因，克隆抗逆相关膜联蛋白Annexin基因，以花生品种花育25号为试验材料，从已知抑制消减杂交文库中获得花生膜联蛋白Annexin类似基因片段，通过RACE技术获得Annexin基因5′-RACE片段。对5′-RACE序列和抑制消减杂交文库中已知基因片段进行拼接，设计特异引物通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增得到该基因，命名为AhAnn1。结果表明，AhAnn1全长为1 277 bp，开放阅读框为951 bp。根据编码区预测AhAnn1编码一条316个氨基酸组成的多肽，预测分子量为36.10 kDa，等电点为7.07。预测该基因编码的蛋白含有膜联蛋白Annexin保守结构域，定位于细胞质中。蛋白序列多重比对和系统发育分析表明，花生与大豆、苜蓿、鹰嘴豆等豆科植物中的膜联蛋白相似性最高，亲缘关系最近。荧光实时定量PCR结果显示，AhAnn1在根系和叶片中的表达量随干旱胁迫程度的增加而增加。由此推测AhAnn1是一种干旱胁迫应答基因，在花生逆境调控中发挥作用。结果为进一步研究花生AhAnn1基因的功能和花生抗逆境胁迫相关分子机理提供了理论基础。

花生；膜联蛋白基因；干旱；系统发育分析；荧光定量PCR

膜联蛋白(Annexins，Ann)是依赖钙离子与磷脂膜可逆结合的一种可溶性保守蛋白家族。Annexin蛋白在动植物及菌类等生物体内普遍存在，在各器官中几乎均有表达[1-2]。研究表明，植物膜联蛋白参与建成膜结构、生成细胞壁、响应逆境胁迫、转导细胞信号、膜泡运输及调控果实成熟等生理过程，对细胞生长、发育、分化及再生修复具有重要作用。……