山竹果皮中羟基柠檬酸含量分析

2017-06-23黄景晟陈遂吴志成广州质量监督检测研究院广东广州511477

化工管理 2017年14期

关键词：山竹波峰管柱

黄景晟陈遂吴志成（广州质量监督检测研究院，广东广州 511477）

山竹果皮中羟基柠檬酸含量分析

黄景晟陈遂吴志成（广州质量监督检测研究院，广东广州 511477）

羟基柠檬酸主要来自于藤黄属植物的果皮，如山竹、南瓜等。羟基柠檬酸能够抑制ATP柠檬酸裂解酶作用，阻止乙酰辅酶A形成，故被利用于瘦身食品中。但过量摄取可能导致人体的伤害。

1 实验材料

市售冷冻山竹、C18液相层析管柱、1.pH测定仪、高效能液相层析仪、恒温水浴槽、超音波振荡器、二次去离子水由Milli-QSP试药级纯水系统制得、精秤天秤、低速离心机、微电脑微波炉、旋涡混合器、减压浓缩机、固相萃取管柱、均质机、紫外光-可见光光谱仪。

2 实验方法

2.1 样品前处理

冷冻山竹样品解冻后，将果肉取出，只取果皮的部分进行实验，将其剪至碎状进行制备及萃取。

2.2 山竹中羟基柠檬酸的萃取

将前处理后的山竹果皮与水以1：2的比例混合，并以60℃水浴萃取20分钟，接着以6μm的滤纸过滤，并重复一次此萃取及过滤步骤，再以活性碳去除山竹果皮萃取液中的花青素，并减压浓缩至25mL，接着加入50mL乙醇去除萃取液中的果胶，经离心后取上清液进行减压浓缩至25mL，并储存于4℃供作检液。

2.3 山竹中羟基柠檬酸的分析

将前处理过后的样品进行萃取，供作检液。取样品萃取检液20μL注射至HPLC，以C18液相层析管柱，移动相为0.1%磷酸水溶液进行层析，并根据标准品波峰的滞留时间对照样品的层析图谱，以确定羟基柠檬酸的波峰，将其积分面积带入标准溶液的检量线中，计算出羟基柠檬酸的浓度。

表一、羟基柠檬酸之侦测极限与定量极限

2.4 以HPLC进行羟基柠檬酸含量分析

（1）移动相中磷酸比例的探讨

使用0.0125,%、0.02%、0.05%、0.1%及0.2%phosphoricacid⁃solution作为移动相进行冲提，流速为1mL/min，比较羟基柠檬酸标准品波峰的分辨率及滞留时间，评估不同浓度下分析标准品的稳定性，找出最佳的磷酸比例。

（2）管柱

以C18液相层析管柱分析羟基柠檬酸的标准溶液。

（3）侦测波长

以紫外光侦测器于波长210nm进行侦测。

（4）标准品检量线的制作

精确秤取59.6%的羟基柠檬酸标准品10mg，以移动相定溶至5mL，并配制成7.45、11.175、14.9、29.8、59.7ppm及223.5、298、447、596、1192ppm，以0.22μm的滤膜过滤，使用前面所述的HPLC最适分析条件分析，以波峰面积为纵轴，以浓度为横轴，制作成低浓度及高浓度两种标准溶液的检量线，以适合不同样品的分析。

（5）计算公式

C：检液中HCA的浓度(μg/mL)

D：稀释倍数

V：定溶体积(mL)

W：检体的重量(g)

3 山竹果皮中羟基柠檬酸的分析

山竹果皮萃取物使用C18管柱并以0.1%的磷酸水溶液为移动相进行分析的层析图如图1(a)所示，而含298ppmHCA标准品的山竹萃取物层析图如图1(b)所示，标准品的滞留时间为6.9分钟。两图比较之后，可发现图1(a)的图谱中没有羟基柠檬酸的波峰，因此显示在山竹果皮中并未含有羟基柠檬酸。而在山竹中亦未测得羟基柠檬酸的存在。