袁敏，邢继红，王莉，葛伟娜，郭棣，张岚

（1华北理工大学生命科学学院基因组学与计算生物学研究中心，河北唐山 063000；2河北农业大学生命科学学院真菌毒素与植物分子病理学实验室，河北保定 071001）

拟南芥开花抑制因子TFL1与GRFs蛋白的相互作用

袁敏1，邢继红2，王莉1，葛伟娜1，郭棣1，张岚1

（1华北理工大学生命科学学院基因组学与计算生物学研究中心，河北唐山 063000；2河北农业大学生命科学学院真菌毒素与植物分子病理学实验室，河北保定 071001）

【目的】研究拟南芥开花抑制因子TFL1与2个GRFs家族成员GRF4和GRF7之间的互作关系，为进一步解析TFL1抑制植物开花的分子机制奠定基础。【方法】以拟南芥cDNA作为模板，利用基因特异性引物，克隆TFL1、GRF4和GRF7，分别连接入门载体pCR8，经菌落PCR扩增和测序鉴定分别获得这3个基因的入门载体 TFL1-pCR8、GRF4-pCR8和 GRF7-pCR8。利用 LR重组的方法将上述 3个入门载体分别与目标载体pGADT7和 pGBKT7重组获得酵母双杂交试验载体 TFL1-BD、GRF4-AD和 GRF7-AD。将 TFL1-BD载体分别与GRF4-AD或GRF7-AD载体共同转化酵母感受态细胞，于双缺（-Leu/-Trp）培养基上30℃培养2—3 d直至长出酵母克隆，选取合适大小的酵母菌落转移到双缺（-Leu/-Trp）和四缺（-Leu/-Trp/-His/-Ade）缺陷培养基上，通过观察酵母菌落的生长情况判断TFL1与GRFs之间的互作关系。利用LR重组的方法将上述3个入门载体分别与目标载体px-nYFP和px-cYFP重组获得TFL1-nYFP、TFL1-cYFP、GRFs-nYFP、GRFs-cYFP双分子荧光互补试验载体，并分别转化农杆菌感受态细胞。将转化TFL1-nYFP或TFL1-cYFP载体的农杆菌分别与转化GRFs-nYFP或GRFs-cYFP载体的农杆菌共注射烟草叶片，培养48 h后在荧光共聚焦显微镜下观察烟草细胞中YFP荧光的表达情况。通过YFP荧光信号的有无来判断TFL1与GRFs之间的互作关系。……