于雷，李永红，秦玺，杨靖清，饶春明

中国食品药品检定研究院，北京 100050

Q-PCR法检测腺病毒基因治疗产品中的复制型腺病毒

于雷，李永红，秦玺，杨靖清，饶春明

中国食品药品检定研究院，北京 100050

目的：建立Q-PCR法检测腺病毒基因治疗产品中的复制型腺病毒（RCA）。方法：首先制备高纯度的pXC1质粒参考品（含有E1基因序列），紫外吸收法定量后经过数学换算得到拷贝数；然后比较染料法和探针法的灵敏度，建立适用的Q-PCR检测方法；最后用新建Q-PCR法定量测定腺病毒基因治疗产品中的RCA。结果：pXC1质粒参考品的拷贝数初步标定为2.6×1010拷贝/μL；探针法的灵敏度比染料法高1000倍；将pXC1质粒参考品应用于Q-PCR（探针法）测定腺病毒基因治疗产品中的RCA，标准曲线回归方程为y=-1.416ln（x）+47.395，R2=0.9966，供试品的Cq值均位于标准曲线范围内。结论：新建Q-PCR法适用于检测腺病毒基因治疗产品中的RCA，且结果准确可靠。

腺病毒基因治疗产品；复制型腺病毒；Q-PCR；pXC1质粒

病毒载体类基因治疗产品除选择性复制的 溶瘤体病毒外，都是非复制型的，但是在病毒包装过程中，病毒基因组可能与包装细胞基因组经过同源重组产生复制型病毒。出于安全有效、质量可控的考虑，必须对该类病毒进行检测，以避免其在人体内无控地自我复制，造成伤害，规避临床隐患[1-4]。

腺病毒是目前基因治疗产品中最常用的病毒载体，其优点在于易操作且产量高。作为载体的腺病毒是经过改造的复制缺陷型，其复制必需基因E1区缺失，不能在除包装细胞系（293、911、PERC6等）以外的细胞中复制增殖[5-7]。……