孙盛梅，牟媛媛

(佳木斯大学附属第一医院妇产科,黑龙江 佳木斯154003)

B7-H4与RRM2在卵巢肿瘤患者中的表达及临床意义①

孙盛梅，牟媛媛

(佳木斯大学附属第一医院妇产科,黑龙江 佳木斯154003)

目的：探讨B7-H4与RRM2在卵巢肿瘤组织中的表达及其临床指导意义。方法：运用免疫组织化学法测定B7-H4与RRM2蛋白在10例正常卵巢组织、20例卵巢良性肿瘤组织、8例交界性卵巢肿瘤组织以及30例上皮性卵巢癌组织中的表达，并分析二者的相关性。结果：B7-H4与RRM2蛋白在卵巢癌组阳性表达率显著高于正常组、良性组、交界组，差异有统计学意义(P<0.01)。B7-H4的表达与病理分期、组织分化及组织类型相关，差异有统计学意义(P<0.05)。RRM2的表达与淋巴结转移、临床分期、细胞分化有关，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：①B7-H4与RRM2的高表达与上皮性卵巢癌的发生有关；②B7-H4与RRM2对上皮性卵巢癌具有协同性表达作用；③上皮性卵巢癌分期越晚、分化越差，B7H4与RRM2表达越高。

B7-H4；RRM2；卵巢肿瘤；免疫组织化学

随着社会经济的发展和国家医疗政策的完善，人们对健康意识的概念越来越强，由原来的治病到防患于未然。对女性来说，健康的最大威胁是生殖系统的肿瘤疾病，其中卵巢的肿瘤最为常见，其致死率最高的要属上皮性卵巢恶性肿瘤[1]，了解卵巢恶性肿瘤的发病机制和寻求有效的肿瘤免疫标记物，对于改善卵巢肿瘤患者的预后具有积极的意义。在抵抗肿瘤细胞中具有显著意义的是T系淋巴细胞，B7家族是T淋巴细胞的协同刺激因子，与T细胞的结合位点是其细胞表面的相应受体[2]，作用机制是以活化T细胞和细胞耐受通过向T细胞输送协同刺激信号。研究者采用生物信息学的途径发现T淋巴细胞的协同刺激因子的新成员—B7-H4。B7-H4可以抑制增殖T细胞，阻断细胞生长周期，还能弱化甚至抑制某些细胞因子的释放以减少细胞的凋亡，研究还表明B7-H4在肿瘤上皮细胞内的高表达还可促进细胞上皮的恶性转归。卵巢癌的发生发展决定于多基因，其组织类型和临床分期与治疗手段和预后紧密相关[3]。在基因中DNA的合成过程中核糖核苷酸还原酶(ribonucleotidereductase，RR)是关键酶，该酶对细胞分裂、增殖及分化具有至关重要的意义，更有助于细胞的生存。RRM2不仅具有RR的活性，也是该酶组成的重要部分，与一系列癌基因均有协同作用，共同促进细胞转化及肿瘤形成。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 对象及标本

选取我院2014-06～2015-12入住妇产科的患者卵巢组织标本共68例，其中10例正常卵巢组织，20例卵巢良性肿瘤组织，8例交界性卵巢肿瘤组织以及30例上皮性卵巢癌组织。患者术前未做任何治疗并排除其他系统肿瘤疾病。所有患者的临床资料均详细完整，年龄16～68岁。 病理诊断均经病理科医师证实，所有标本取下后常规固定等程序后备用。

1.1.2 实验用品

兔抗人B7-H4抗体及兔抗人RRM2抗体，超净工作台，恒温箱，显色剂，抗体稀释液。

1.2 实验方法1.2.1 免疫组化步骤

通过病历号选取病理科存档的蜡块切片脱蜡、封闭、滴加兔抗人B7-H4、RRM2，然后加二抗，显色，复染，最后脱水、封片。阳性参照物为已知的卵巢癌切片，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.2 结果判定

B7-H4蛋白在卵巢组织中主要有细胞浆及细胞膜阳性表达，B7-H4染色分析计数：全面观察每张切片，以细胞浆内、细胞膜上出现棕黄色颗粒为评判标准。根据阳性细胞所占比例判定，阳性细胞<10%者为(-)，10%～25%者为(+)，26%～50%者为()，>50%为()。RRM2主要有胞浆阳性表达，最终判定：染色阳性细胞占计数细胞比例<25%者为(-)，26%～50%者为(+)，51%～75%者为()，>75%为 ()。

1.3 统计学方法

采用SPSS17.0统计软件处理，B7-H4与RRM2表达情况采用方差分析，各相关因素比较用秩相关，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1B7-H4在卵巢肿瘤和正常卵巢组织中的表达

B7-H4蛋白主要有细胞浆及细胞膜阳性反应。B7-H4在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织、卵巢交界性肿瘤组织及卵巢癌组织中比较差异有统计学意义(χ2=35.818，P<0.01)见表1。

表1 卵巢肿瘤组织和正常卵巢组织中B7-H4的表达情况(例)

2.2RRM2在卵巢肿瘤和正常卵巢组织中的表达

RRM2主要有胞浆阳性反应。RRM2在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织、卵巢交界性肿瘤组织及卵巢癌组织中比较差异有统计学意义(χ2=31.719，P<0.01)见表2。

2.3B7-H4及RRM2在上皮性卵巢癌组织中的表达情况

根据免疫组化结果及统计学分析，B7-H4表达的高低与临床分期(χ2=5.963，P<0.05)、组织分化(χ2=4.802，P<0.05)、组织类型(χ2=5.487，P<0.05)有关，而与年龄(χ2=1.06，P>0.05)及淋巴结转移(χ2=0.215，P>0.05)无关。RRM2表达与临床分期(χ2=5.834，P<0.05)、组织分化(χ2=6.429，P<0.05)、淋巴结转移(χ2=4.537，P<0.05)有关，而与年龄(χ2=0.023，P>0.05)及组织类型(χ2=0.085，P>0.05)无关，见表3。

表2 卵巢肿瘤组织和正常卵巢组织中RRM2的表达情况(例)

表3 B7-H4及RRM2在上皮性卵巢癌组织中的表达情况

2.4 上皮性卵巢癌组织中B7-H4与RRM2之间的关系

经分析B7-H4与RRM2表达正相关(r=0.558，P<0.01)。见表4。

表4 皮性卵巢癌组织中B7-H4和RRM2表达的关系

3 讨论

在女性生殖系统肿瘤中，致死率最高的是卵巢恶性肿瘤，组织类型最常见的是上皮性卵巢癌。尽管常规健康普查日趋完善，以外科手术为主以及化学治疗等辅助治疗技术的实施，但患者的死亡的主要原因是病变的复发以及转移，使其病死率一直居高不下。最主要的原因就是缺乏早期临床诊断标志物，75%患者被诊断为卵巢癌时，肿瘤已浸润至卵巢外[4]，为发展至临床分期的Ⅲ期或Ⅳ期，5年存活率仅为5%～20%。假如卵巢肿瘤恶性病变仅局限于卵巢，通过手术等治疗，5年存活率可高至85%～95%，所以探索为之有效的卵巢癌临床诊断标志物已成为热点。

B7-H4负反馈于T细胞主要是经过对T细胞的增殖受到抑制、影响细胞因子(如IL-2等)的生长和调节细胞生长周期来实现。加强B7-H4蛋白表达可能导致肿瘤免疫因子逃逸从而与卵巢癌的发生发展有关[5]，B7-H4有可能是促癌基因。卵巢癌的发病机制复杂，可能由多基因的行为改变和遗传学的异常决定，与组织细胞的分裂、增殖及分化密切相关[6]，脱氧核糖核酸参与了这一系列的生物行为，RRM2是脱氧核糖核酸的关键酶核糖核苷酸还原酶的重要组成成分，其作用是促使其细胞转化和形成肿瘤细胞。

目前，卵巢癌的发病率呈逐年递增趋势，但临床诊断率却仍较低，研究其发病机制及探索其有效的诊断免疫标志物刻不容缓。根据p53信号通路的参考途径，RRM2的位点位于p53信号通路中下游分支，研究表明B7H4和p53的联合检测更有助于胃癌等肿瘤的诊断，通过实验证明RRM2在卵巢肿瘤的表达，以及RRM2和B7H4对卵巢肿瘤的诊断的相关性可大大提高卵巢恶性肿瘤的检出率。这不仅仅可以提高患者的生存率，更对该病的临床诊疗及其预后提供新的思路，更有益于女性的生命健康。

[1]谢幸，苟文丽.妇产科学[M].第8版.北京：人民卫生出版社，2013:321-333

[2]潘建立，牛清华.B7-HE、P53、CEA在胃癌中的表达及临床意义[J].中国医疗前沿，2010，5(23)：39-40

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[4]徐佳佳，吴英杰.70例老年妇女卵巢癌患者临床分析[J]. 黑龙江医药科学，2014， 37(1)：36-37

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[6]刘莉霞，李术平，何秀萍.Survivin蛋白在卵巢癌组织中的表达及临床意义[J].黑龙江医药科学，2014， 37(2)：29-31

孙盛梅(1966～)女，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，硕士研究生导师。

牟媛媛(1989～)女，黑龙江萝北人，在读硕士研究生。E-mail：1015661755@qq.com。

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