赵艳玲, 姚婕

(华侨大学 化工学院， 福建 厦门 361021)

巨尾桉铜分子伴侣EuCCS基因的克隆及表达分析

赵艳玲, 姚婕

(华侨大学 化工学院， 福建 厦门 361021)

以巨尾桉为研究对象，克隆得到巨尾桉铜分子伴侣(CCS)基因(GenBank注册号为KJ755351.1)，生物信息学分析表明:EuCCS蛋白定位于叶绿体，与龙眼同源基因的一致性达到99%.巨尾桉CCS的原核表达载体pET-EuCCS在大肠杆菌细胞内可以稳定表达，超氧化物歧化酶(SOD)活检测结果表明:转化菌株的SOD酶活性比对照菌株高，说明外源基因EuCCS具有生物学活性.利用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术分析CCS在巨尾桉中的表达特性，结果表明：在植株生长旺盛的部位,CCS表达量较大，如植株幼叶，随植株叶片慢慢衰老，CCS的表达量也随之下降；在组培苗中，叶片的CCS表达量最大，其次是茎.

巨尾桉; 铜分子伴侣; 克隆; 原核表达; 聚合酶链式反应

铜离子是细胞色素氧化酶、铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase，Cu/ZnSOD)、漆酶、赖氨酰氧化酶和多巴胺单加氧酶等所必需的辅助因子，在维持植物正常的新陈代谢及生长发育中发挥着重要作用[1].当铜离子超过一定值时，铜离子参与Fenton反应会生成大量的羟自由基，对生物体产生重金属毒害作用，所以在长期进化过程中，生物体内形成一套完整的铜代谢调控机制，分子伴侣和铜螯合剂调控细胞内和细胞外铜的转运，达到生物体内铜离子的稳态[2].铜分子伴侣(CCS)可以传递铜离子到Cu/ZnSOD中,并将其激活生成有活性的酶分子[3-7].相关研究表明:CCS在调控植物体内铜离子平衡过……