余 建 刘长英 赵爱春 王传宏 蔡雨翔 余茂德



桑树1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因()启动子功能分析

余 建 刘长英 赵爱春 王传宏 蔡雨翔 余茂德*

西南大学生物技术学院 / 西南大学农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室, 重庆 400715

1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶(ACO)作为关键酶, 能够催化1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)形成乙烯。为探究桑树基因在桑树生长发育和抵御外界胁迫中的功能, 本研究构建了pMnACO::GUS的植物表达载体并转化拟南芥。采用GUS组织染色法鉴定转基因拟南芥不同生长阶段及胁迫处理后的GUS活性。通过PCR克隆得到和启动子片段, 它们分别为1518 bp和1429 bp, 启动子区域有大量的TATA-box、CAAT-box和其他响应外界刺激的顺式作用元件。GUS活性分析显示启动子能驱动GUS在拟南芥中表达;启动子能驱动GUS在拟南芥的根、叶片、花瓣、花药、花丝、柱头以及果荚中表达, 且活性较强;启动子不能驱动GUS在果荚中无表达。转和植株经不同逆境处理后GUS表达活性不同, 转植株的GUS活性随处理延长时间而减弱, 转植株GUS活性随处理时间延长而增强。qRT-PCR检测2周苗龄的桑幼苗在经过胁迫处理后和的基因表达量, 发现基因的表达模式与启动子GUS活性变化趋势一致。本研究结果表明,为诱导型启动子,兼具组成型启动子特性,2兼具组织特异型启动子特性。在转基因植株中对胁迫响应能力更强, 预示着可将其用来调控改良桑树品种抗逆性靶基因;可能与果实成熟有关, 可将其启动子作为果实特异性启动子对桑椹品质进行合理改良。……