史彩华+胡静荣+李传仁+王文凯

摘要：实时荧光定量PCR（qRT-PCR）具有灵敏度高、特异性强等优点，是昆虫目标基因表达和转录分析最常用的技术手段之一。然而，为了消除样本在RNA产量、质量及逆转录效率上存在的差异，在进行qRT-PCR分析目标基因表达量时必须选择合适的“管家基因”作为内参基因。近年来，大量研究表明不同昆虫和不同试验条件选择的内参基因也不尽相同。因此，选择合适的内参基因是正确判断qRT-PCR结果分析的关键。从内参基因的选择、昆虫内参基因的研究和内参基因稳定性评价等几个方面进行综述，以期为研究者在将来的昆虫试验中选择合适的内参基因提供理论参考依据。

关键词：内参基因；昆虫；qRT-PCR；进展

中圖分类号： S436.33文献标志码： A文章编号：1002-1302（2017）07-0001-07

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）技术1996年由美国Applied Biosystems公司发明，随后经过进一步技术升华，实现了基因表达检测从定性到定量的飞跃[1]。该技术具有高效快速、重复性好、定量准确、灵敏度高和高通量等优点，尤其可对样本量少、无法用Northern-blot等手段检测的样本进行精确检测[2]。因此该技术是昆虫目标基因表达和转录分析最常用的技术手段之一。

qRT-PCR分为绝对定量和相对定量2种。绝对定量具有高度特异性、重复性好，可进行多重定量，每次试验时必须做标准曲线来分析未知样品中目标核酸序列的绝对拷贝数[3]。由于标记成本太高，通常应用在临床诊断上[4]。针对基因的差异表达分析，科研工作者们最常用的检测手段是采用相对定量法，其优点在于成本低、操作方便[5]。……