于林港宿玲恰吴敬，

（1. 江南大学食品科学与技术国家重点实验室，无锡 214122；2. 江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，无锡 214122）

Escherichia coli str. K-12 substr. MG1655海藻糖酶Tre F的重组表达及性质研究

于林港1宿玲恰2吴敬1，2

（1. 江南大学食品科学与技术国家重点实验室，无锡 214122；2. 江南大学生物工程学院 工业生物技术教育部重点实验室，无锡 214122）

海藻糖酶（Trehalase）是一种海藻糖水解酶，能够特异性的将海藻糖分解为两分子的葡萄糖。为了将Escherichia coli str. K-12 substr. MG1655的海藻糖酶基因Tre F在E. coli BL21（DE3）中重组表达和应用，该研究通过PCR扩增获得E. coli str. K-12 substr. MG1655的海藻糖酶基因Tre F，构建了基因工程菌E. coli BL21（DE3）/pET-24a（+）-Tre F。对重组菌进行摇瓶发酵，25℃，IPTG浓度为0.4 mmol/L时，摇瓶发酵诱导24 h时得到最高酶活为107 U/mL。进一步研究了海藻糖酶的酶学性质，发现该海藻糖酶的最适pH为7.0，最适温度为50℃；此外，将该酶应用于海藻糖的水解，起始海藻糖浓度为300 g/L，初始pH 7.0、反应温度30℃，加酶量为84 U/g，反应36 h，葡萄糖转化率可达98.4%。该研究是首次将E. coli str. K-12 substr. MG1655海藻糖酶基因Tre F在E. coli BL21（DE3）宿主中重组表达的报道。

海藻糖酶；基因克隆；重组表达；酶学特性

海藻糖（Trehalose）分子是由两个吡喃葡萄糖环分子以α，α-1，1-糖苷键连接而成的一种十分稳定的非还原二糖［1］。海藻糖广泛存在于自然界的生物体内，包括细菌、真菌、昆虫、低等植物、脊椎动物，特别在真菌和昆虫中的含量非常高，是国际上最近开发的主要低聚糖之一［2-5］。虽然海藻糖的来源很广泛，但能在体内大量积累海藻糖的生物并不是很多［6］。目前正在研究和开发的海藻糖制备方法主要有微生物抽提法、发酵法、酶转化法及基因重组法［6］。……