王智文陈海波宋福平郭淑元

（1. 北京理工大学生命学院，北京 100081；2. 中国农业科学院植物保护研究所，北京 100193）

苏云金芽胞杆菌分泌蛋白的鉴定及分析

王智文1陈海波1宋福平2郭淑元1

（1. 北京理工大学生命学院，北京 100081；2. 中国农业科学院植物保护研究所，北京 100193）

研究苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）在生长发育过程中分泌蛋白的类型和含量，尤其是胞外蛋白酶，对于充分了解该菌的杀虫机理、扩大该菌的应用具有重要意义。通过制备Bt_HD73过渡期（transition phase）的分泌蛋白质样品，进行质谱检测并分析其分泌蛋白的种类、含量、功能和信号肽等。结果表明，Bt_HD73在过渡期初期有54种胞外蛋白质，其中酶类最多，占所有分泌蛋白的66.30%，且主要为蛋白水解酶；毒力蛋白次之，占所有分泌蛋白的14.53%。在54种分泌蛋白中，发现27种含有经典Sec型信号肽（Secretory signal peptide，Sec-type SP），信号肽的长度在24-40个氨基酸之间。因此，Bt_HD73产生分泌蛋白的能力较强，在过渡期可分泌大量酶类，尤其是蛋白水解酶。同时还建立了该菌株的信号肽库，包括27种具有引导外源蛋白分泌潜力的信号肽。

苏云金芽胞杆菌；分泌表达；分泌蛋白质；胞外蛋白酶；信号肽

利用细菌生产重组蛋白方便快捷，然而，常用的细菌表达系统如大肠杆菌（Escherichia coli）、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）等不易将外源可溶性蛋白质产物直接分泌到培养基中，这不仅限制了产量，还增加了下游加工的时间和金钱成本［1］。此外，大肠杆菌的外膜中存在内毒素脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）［2］，会引起发热和休克，且从重组蛋白中除去细菌外毒素难度大，经济成本高，产品安全性低。……