杨雪芳，张洋洋，张琼姝，王斌，郭海利，张小民

（1.山西大学生命科学学院，山西太原030006；2.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

中国沙棘不同器官芦丁含量的比较

杨雪芳1，张洋洋1，张琼姝1，王斌1，郭海利2，张小民1

（1.山西大学生命科学学院，山西太原030006；2.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

试验采用高效液相色谱法对中国沙棘根、茎、叶、果实中芦丁的含量进行了测定及比较。所用色谱柱为Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.5%磷酸（33∶67），检测波长为254 nm。结果表明，中国沙棘根、茎、叶、果实中芦丁的含量分别为0.132 1，0.216 3，0.930 2，0.127 0 mg/g。研究结果可为沙棘芦丁的进一步开发和利用提供理论指导。

中国沙棘；高效液相色谱法；芦丁含量；不同器官

沙棘（Hippophae rhamnoides L.）又名醋柳、酸刺、酸溜溜等，为胡颓子科沙棘属落叶灌木或小乔木。我国沙棘资源丰富，素有“沙棘王国”之称[1-3]。沙棘属植物在我国分布有5个种（柳叶沙棘、江孜沙棘、肋果沙棘、西藏沙棘、沙棘）和属于沙棘种的4个亚种（中国沙棘、云南沙棘、中亚沙棘、蒙古沙棘）[4]。其中，中国沙棘亚种（H.rhamnoid L.subsp. sinens Rousi）在我国分布最广，山西省分布的野生沙棘全部为中国沙棘[5-6]。

芦丁是沙棘黄酮中重要的生物活性成分，具有清除自由基、抗脂质过氧化、舒张血管等作用[7]，是一种天然的抗氧化剂[8]，对于沙棘的开发和利用意义重大。王军宪等[9]通过分光光度计对中国沙棘不同部位总黄酮含量进行了测定；李春英等[10]通过分光光度计对沙棘不同部位总黄酮含量进行了测定及比较；谢久祥等[11]通过分光光度计对青海沙棘不同部位总黄酮含量进行了比较研究。通过前人研究发现，沙棘的果实、种子、叶、茎等各部器官中都含有丰富的营养及多种生物活性成分，并发现它有多方面经济价值和生态价值，广泛引起了人们的关注。

由于分光光度计不能准确测定黄酮含量，故本试验首次选用高效液相色谱法测定中国沙棘根、茎、叶、果实这4个沙棘器官中芦丁的含量，旨在为沙棘的有效开发和利用提供依据。

1 材料和方法

1.1 材料

供试材料为2015年10月从山西省晋中市祁县来远镇唐河底村滩地采集的中国沙棘根、茎、叶、果实，经烘干后备用。

1.2 仪器

岛津SPD-15C高效液相色谱仪（日本，岛津公司）；N-3000色谱工作站（浙江大学）；BG-01超声波清洗机（广州邦洁超声波设备有限公司）；FA1604N电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；HealForce SMART-N超纯水机（上海康雷分析仪器有限公司）。

1.3 试剂

芦丁对照品购自国家标准物质网；甲醇为色谱纯，水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

1.4 方法

1.4.1 色谱条件色谱柱为DiamonsilC18柱（150mm× 4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.5%磷酸（33∶67），流速为1.0 mL/min，检测波长254 nm，柱温是30℃。进样量20 μL，进样前经0.22 μm的针头过滤器过滤。

1.4.2 溶液的配制

1.4.2.1 标准品溶液的配制精密称取芦丁标准品31.25 mg，置于25 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度线，待标准品溶解后，摇匀，即得标准品溶液。1.4.2.2供试样品的配制分别称取沙棘根、茎、叶、果实粉末各5 g，置50 mL具塞锥形瓶内，精密加入甲醇50 mL，称质量，超声波辅助提取40 min（功率80 W，频率40 kHz），待其冷却至室温，再称其质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液；再经0.22 μm有机微孔滤膜过滤，取滤液，即得供试样品。

2 结果与分析

2.1 芦丁对照品的HPLC分析

在1.4.1色谱条件下得到芦丁标准品的HPLC图，如图1所示。

2.2 线性关系的考察

分别精密吸取芦丁对照品溶液1，5，10，15，20 μL。在1.4.1色谱条件下，分别注入高效液相色谱仪进行测定。以芦丁的进样量（X，μg）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，得到回归方程为：Y＝1.0× 106X，R2＝0.996 2（n＝5）。结果表明，芦丁对照品进样量在0.25～5.00 μg时，芦丁进样量与峰面积呈现良好的线性关系。

2.3 精密度试验

精密吸取1.25 μg/mL芦丁标准溶液20 μL，进样，重复5次。结果表明，芦丁峰面积的RSD为1.37%（n＝5），精密度较好。

2.4 稳定性试验

取中国沙棘叶供试样品，分别于0，2，4，6，8，12 h进样，在1.4.1色谱条件下测定，结果表明，芦丁峰面积的RSD为1.12%（n＝6），表明中国沙棘供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.5 重复性试验

取中国沙棘叶供试样品5份，每份约5 g，精密称量，按1.4.2.2方法制备样品溶液，在1.4.1色谱条件下分别进样测定，RSD为1.28%，表明重现性良好。

2.6 加样回收试验

精密称量已知含量的供试品5份，每份约5 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，分别精密加入1 mL质量浓度为1.25 mg/mL的芦丁对照品溶液，按照1.4.2.2供试品溶液的制备方案制备成5份供试品溶液，在1.4.1色谱条件下进行测定，结果如表1所示。试验结果表明，试验中测定的芦丁含量的加样回收率符合要求。

表1 沙棘叶芦丁回收率测定结果

2.7 样品含量测定

取中国沙棘根、茎、叶、果实在1.4.2.2的方法下制备好供试样品，在1.4.1色谱条件下，分别进样20 μL，记录峰面积，计算样品中芦丁的含量。

由表2可知，中国沙棘根、茎、叶和果实中所含的芦丁含量不同，依次为0.132 1，0.216 3，0.930 2，0.127 0 mg/g。可以得出，沙棘叶中芦丁含量最高，明显高于根、茎、叶中的芦丁含量；果实中的芦丁含量最低；沙棘根中的芦丁含量略高于沙棘果实中的芦丁含量；沙棘茎中的芦丁含量略高于根中的芦丁含量。

表2 中国沙棘不同部位芦丁含量mg/g

3 讨论

本试验采用高效液相色谱法测定中国沙棘根、茎、叶、果实不同器官中芦丁的含量。用50%甲醇在超声波辅助提取下提取，滤液经0.22 μm有机微孔滤膜过滤后，利用反向高效液相色谱法测定沙棘不同器官芦丁的含量。结果表明，芦丁进样量在0.25～5.00 μg，与峰面积呈现良好的线性关系。

中国沙棘根、茎、叶、果实中芦丁含量分别为0.132 1，0.216 3，0.930 2，0.127 0 mg/g，野生中国沙棘芦丁含量大小依次为叶＞茎＞根＞果实。赵文娟等[12]研究结果表明，吴起野生沙棘中总黄酮含量沙棘果实＞沙棘叶＞沙棘枝杆，与本研究结果有差异，可能是因为所用测定方法以及沙棘植物所处的地理位置、气候环境等因素存在差异。而谢久祥等[11]研究表明，叶中总黄酮含量远高于根和茎，与本研究结果相符。沙棘叶所含芦丁含量最高，因此，可以大力对沙棘叶进行开发和产品加工，扩大沙棘叶资源的有效利用。

山西省的野生沙棘种植面积约占全国的1/2，位居首位[13]，中国沙棘资源丰富，大力开发野生沙棘可以带来经济效益和生态效益。目前，对沙棘的开发和利用主要是针对沙棘果，其产品有沙棘汁、沙棘果油、沙棘果醋、沙棘化妆品等，而对沙棘叶开发和利用的报道较少，其产品只有沙棘叶茶[14-15]。根据前人的研究来看，沙棘叶除芦丁含量较高外，还含有科罗索酸等多种生物活性物质[16-18]，有较为广阔的开发空间，可广泛应用于食品、医药、轻工业等产品加工中。

［1］黄雪玲，裴金金，杨淑慎，等.沙棘的开发利用研究与应用[J].陕西林业科技，2006（1）：33-36.

［2］从心海，梁一民，李代琼.黄土高原半干旱区沙棘根系特性与土壤水分动态研究[J].水土保持通报，1990（6）：98-103.

［3］王均明，刘志福.沙棘根系的生物学特性与造林地选择[J].中国水土保持，1993（5）：32-34.

［4］黄铨，史玲芳，王士坤，等.沙棘种植技术与开发利用[M].北京：金盾出版社，1998：1-17，113-123．

［5］齐虹凌，于泽源，李兴国.沙棘研究概述[J].沙棘，2005，18（2）：37-41.

［6］黄铨，于倬德.沙棘研究[M].北京：科学出版社，2006.

［7］臧志和，曹丽萍，钟铃.芦丁药理作用及制剂的研究进展[J].医药导报，2007，26（7）：758.

［8］刘娥，郭鹏.高效液相色谱法测定钟祥苦荞茶中芦丁的含量[J].中国医院药学杂志，2013，33（13）：1110-1111.

［9］王军宪，刘万军，尤晓娟，等.中国沙棘不同部位总黄酮含量测定初报[J].沙棘，1999，12（2）：45-46.

［10］李春英，王微，赵春建，等.沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较[J].植物研究，2005，25（4）：453-456.

［11］谢久祥，林恭华，都玉蓉，等.青海沙棘不同部位总黄酮含量比较研究[J].天然产物研究与开发，2012（S1）：45-48.

［12］赵文娟，马齐，陈卫锋，等.吴起野生沙棘不同部位总黄酮含量测定[J].河北林果研究，2010，25（3）：252-254.

［13］孟晶岩，王贤萍，巫东堂，等.山西省沙棘资源利用现状及发展对策[J].山西农业科学，2004，32（4）：64-67.

［14］马桔云，程明，战丹.沙棘化学成分的研究进展[J].黑龙江医药，2001，14（3）：208-209.

［15］高月萍.沙棘的开发利用价值研究[J].现代农业，2016（3）：82-83.

［16］吴哲，李小玉，田晓东，等.HPLC法测定桑叶和沙棘叶中科罗索酸的含量[J].山西农业科学，2014，42（11）：1169-1171.

［17］张璐，田晓东，王斌，等.沙棘叶中科罗索酸浓缩物的测定方法[J].山西农业科学，2016，44（1）：30-32.

［18］田晓东，张璐，张琼姝，等.沙棘叶中科罗索酸浓缩工艺初探[J].山西农业科学，2016，44（2）：239-241.

Comparison of Rutin Contents in Different Organs of Chinese Seabuckthorn

YANGXuefang1，ZHANGYangyang1，ZHANGQiongshu1，WANGBin1，GUOHaili2，ZHANGXiaomin1
（1.College ofLife Science，Shanxi University，Taiyuan 030006，China；2.Shanxi Jinkehai Biological TechnologyCo.，Ltd.，Taiyuan 030006，China）

The contents of rutin in the roots,stems,leaves and fruits of Chinese seabuckthorn were determined by HPLC.The chromatographic column was Diamonsil C18column（150 mm×4.6 mm,5 μm）.The mobile phase consisted of methanol-0.5% phosphoric acid（33∶67）,and the detection wavelength was 254 nm.The results showed that the contents ofrutin in roots,stems,leaves and fruits were 0.132 1,0.216 3,0.930 2,0.127 0 mg/g,respectively.It will provide theoretical guidance for the further development and utilization ofrutin ofseabuckthorn.

Chinese seabuckthorn;HPLC；rutin content;different organs

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.05.12

S793.6

：A

：1002-2481（2017）05-0722-03

2016-11-29

杨雪芳（1992-），女，山西大同人，在读硕士，研究方向：植物化学与药理。张小民为通信作者。