杨 超， 李 卓△， 康 炜， 田 宇， 董学君

1西安医学院第一附属医院检验科，西安 7100772浙江省绍兴市人民医院临床检验中心，绍兴 312000

曲古霉素A促进ICR小鼠骨髓间充质干细胞体外分化为肝细胞*

杨 超1， 李 卓1△， 康 炜1， 田 宇1， 董学君2

1西安医学院第一附属医院检验科，西安 7100772浙江省绍兴市人民医院临床检验中心，绍兴 312000

目的 探讨曲古霉素A(trichostatin A，TSA)在ICR(Institute of Cancer Research，ICR)小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs)向肝细胞体外分化中的作用。方法 分离培养正常小鼠mBM-MSCs，流式细胞仪检测mBM-MSCs表面抗原，实时荧光定量PCR检测肝细胞特异性基因甲胎蛋白(-fetoprotein，AFP)和白蛋白(albumin，ALB)，生化分析仪测定尿素分泌量，高碘酸-希夫反应测定肝细胞合成与储存糖原能力；检测TSA处理前后mBM-MSCs增殖、细胞周期和染色质结构的变化，Western blot测定mBM-MSCs组蛋白3(Histone 3，H3)和组蛋白4(Histone 4，H4)乙酰化程度改变。结果 分离所得mBM-MSCs细胞表面CD44、CD73、SCA-1呈阳性反应，部分细胞CD90、CD105、STRO-1呈阳性反应，CD11b和CD45呈阴性反应；与未添加TSA组比较，诱导7 d后，TSA处理组中AFP明显增高(P<0.05)，ALB和尿素分泌量开始增多，继续诱导14和21 d后，TSA处理组中ALB分别为(0.52±0.08)和(0.92±0.08)，呈明显升高(均P<0.05)，尿素分泌量分别为(0.23±0.02)mmol/L和(0.36±0.03)mmol/L，也呈明显升高(均P<0.05)，且细胞储存的糖原更加丰富，而AFP水平逐渐下降；经TSA处理后，TSA浓度越大对mBM-MSCs增殖的抑制效应越强，细胞处于G0/G1期的比例明显增加，细胞核中异染色质的状态由浓缩、密集变为散状、疏松；Western blot结果显示2.0 mmol/L TSA处理后mBM-MSCs组蛋白H3和H4的乙酰化水平显著增加(均P<0.05)。结论 TSA能够阻断mBM-MSCs组蛋白H3和H4的去乙酰化，打破组蛋白乙酰化的平衡状态，解除转录抑制，从而促进转录，提高其向肝细胞分化的效率。

曲古霉素A； 骨髓间充质干细胞； 分化； 肝细胞； 乙酰化

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs)是一类具有高度可塑性和多向分化潜能的成体干细胞[1-4]。近年来，学者们采用多种动物模型和不同分化诱导技术，探讨分化的可能机制过程，证实BM-MSCs体外可以分化为肝样细胞[5-8]，但分化诱导效率低，不足以应用到临床。陈烨等[9-10]曾引入组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸诱导骨髓间充质干细胞分化肝细胞，发现可提高其分化效率。而对于另一种去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(Trichostatin A，TSA)引起的组蛋白乙酰化修饰在骨髓间充质干细胞分化肝细胞中的作用机制，报道甚少。……