马晓玉，刘晓龙，魏茂凯，谢跃洋，张志峰

（中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室，山东青岛266003）

单环刺螠Bcl-xL基因的鉴定及对硫化物的应激反应

马晓玉，刘晓龙，魏茂凯，谢跃洋，张志峰

（中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室，山东青岛266003）

Bcl-xL是Bcl-2家族中一类重要的抗凋亡因子，其功能主要是抑制细胞凋亡、促进肿瘤发生。为了探知Bcl-xL在生物硫化物应激中的作用，本实验以耐硫生物单环刺螠（Urechis unicinctus）为研究对象，RACE扩增获得一个长度为1 426 bp的单环刺螠Bcl-xL全长cDNA序列，推导的氨基酸序列包含Bcl-xL4个保守的BH结构域和1个跨膜区域。使用该cDNA的完整开放阅读框序列，构建了原核表达载体pET28a-Bcl-xL，体外诱导表达该重组蛋白；镍柱纯化得到纯度为90%的纯化蛋白，并制备多克隆抗体。Western blotting结果显示：单环刺螠暴露于50 μmol/L硫化物中2 h-24 h内其呼吸肠中Bcl-xL含量显著增加（P<0.05），然而在150 μmol/L硫化物中48 h-72 h内其呼吸肠Bcl-xL含量显著降低（P<0.05），暗示Bcl-xL抑制细胞凋亡途径在单环刺螠应对低浓度硫化物暴露时发挥作用，而在高浓度硫化物暴露下Bcl-xL不能发挥抑制细胞凋亡的作用。

单环刺螠；Bcl-xL；细胞凋亡；硫化物

Bcl-2家族成员可以分为3类：第Ⅰ类含有4个Bcl-2同源结构域（BH1、BH2、BH3、BH4），具有抗凋亡的作用；第Ⅱ类含有3个Bcl-2同源结构域（BH1、BH2和BH3），具有促凋亡的作用；第Ⅲ类只含有BH3结构域，具有促凋亡的作用（Cory et al，2003;郭文娟等，2008;Fulda et al，2010）。Bcl-xL属于第Ⅰ类Bcl-2蛋白，它可通过3个途径抑制细胞的凋亡。①Bcl-xL与线粒体凋亡通路（内源性凋亡途径）中的Apaf-1分子结合，阻止Apaf-1的寡聚化，进而抑制Caspase9的活化和细胞的凋亡（Hu et al，1998）；②Bcl-xL通过阻断Bax（第II类Bcl-2蛋白）对线粒体外膜的破坏发挥抗凋亡作用（Breckenridge et al，2004）；③Bcl-xL通过干扰死亡诱导信号复合体DISC的组装，抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Casepase-8的活性从而抑制凋亡（Wang et al，2004）。

在应对各种环境因子时，Bcl-xL的反应不同。……