王贵升尹斐斐（①山东大学生命科学学院 山东 济南 250100 ②山东省动物疫病预防与控制中心 山东 济南 山东省威海市动物疫病预防控制中心）

肺炎克雷伯氏菌PCR检测方法的建立

王贵升①②尹斐斐③（①山东大学生命科学学院 山东 济南 250100 ②山东省动物疫病预防与控制中心 山东 济南 ③山东省威海市动物疫病预防控制中心）

依据GenBank中肺炎克雷伯氏菌的部分已知序列，利用Primer Premier 5设计两对引物，通过优化反应条件，建立一种检测肺炎克雷伯氏菌的诊断方法。特异性和敏感性试验显示，该方法能特异地检测肺炎克雷伯氏菌，其最低能检测的细菌浓度为1×10-4Mcf，整个检测扩增在3h内完成。该结果表明本试验所建立的PCR方法的灵敏度及特异性均较好，可用于快速检测肺炎克雷伯氏菌。

肺炎克雷伯氏菌 PCR 检测

肺炎克雷伯氏菌(K.pnenmoniae)是一种G-杆菌，属于肠杆菌科，条件性致病菌[1]。肺炎克雷伯氏菌与大肠杆菌在普通的营养琼脂、麦康凯琼脂等培养基上具有极高的相似性，细菌的形态、颜色、气味都很相近，革兰氏染色镜检中都是短小的G-小杆菌[2]。在常规的细菌培养中很难将肺炎克雷伯氏菌和大肠杆菌区别开来，而做细菌的生化鉴定和16sRNA鉴定需要比较长的时间，约3～4d的时间。如果做16sRNA鉴定还需要进行测序，成本比较高。另外，毛皮动物克雷伯氏菌病以支气管炎、肺炎，败血症，脑膜炎，腹膜炎，腹泻等为主要症状；与绿脓杆菌也引起的肺炎的症状相同[3-5]，因此，建立快速检测和鉴定肺炎克雷伯氏菌的方法具有重要意义。……