李 敏，李俐睿，岳建国，周立新，黄 勇

（1.成都市动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041；2.四川农业大学，四川 温江 611130）

鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白克隆表达与免疫原性检测

李 敏1，李俐睿1，岳建国1，周立新1，黄 勇2

（1.成都市动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041；2.四川农业大学，四川 温江 611130）

本文以IBV N蛋白为研究对象，首先从鸡胚培养的IBV ZY3毒株尿囊液中提取基因组RNA，然后利用软件对其N蛋白抗原表位进行预测分析，设计一对特异性引物对免疫原性好、亲水性强、表位可能性大的保守片段进行扩增，片段大小为818bp；将扩增产物与表达载体pET-32a（+）连接并转入大肠杆菌BL21中诱导表达，用SDS-PAGE检测表达的重组N蛋白大小为50kDa；用Ni-NTA Superflow纯化重组N蛋白后，采用抗鸡IBV血清与之进行Western blot反应，检测其免疫原性，结果显示重组蛋白免疫原性良好。该结果对进一步研究IBV N蛋白及建立鸡传染性支气管炎的诊断方法有重要意义。

鸡传染性支气管炎病毒；N基因；原核表达；Western blot

鸡传染性支气管炎（IB）由鸡传染性支气管炎病毒（IBV）引起，是一种急性、高度接触传染性呼吸道疾病[1-2]。IBV一直不断的变异和发展，尽管疫苗已被广泛使用，但因其血清型复杂、变异频繁、不同血清型之间缺乏交叉保护性，使得鸡传染性支气管炎在世界范围内广泛流行[3-6]。近年来，对IBV N蛋白的报道逐渐增多。Ignjatovic等[7]研究发现，N蛋白免疫动物后能诱导产生高效价的特异性抗体，且与S和M蛋白相比，N蛋白诱导产生的交叉反应性ELISA抗体出现时间更早，效价也更高。Ignjatovic等[8]通过使用单抗对其进行抗原表位检测，结果8株单抗能与N蛋白上的7个非重叠表位发生特异性结合，确定了N蛋白上抗原表位不少于7个。……