董嘉文，李林林，孙敏华，张建峰，邝瑞欢，胡奇林，张春红

（1. 广东省农业科学院动物卫生研究所 广东省兽医公共卫生公共实验室 广东省畜禽疫病防治研究重点实验室，广州 510640；2.福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州 350013）

·研究论文·

鸭坦布苏病毒JM株E蛋白的截断表达及间接ELISA方法的建立

董嘉文1，李林林1，孙敏华1，张建峰1，邝瑞欢1，胡奇林2，张春红1

（1. 广东省农业科学院动物卫生研究所 广东省兽医公共卫生公共实验室 广东省畜禽疫病防治研究重点实验室，广州 510640；2.福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州 350013）

本研究利用RT-PCR扩增鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）JM株E基因截断片段（822 bp），并将其克隆至原核表达载体pET32a ( + )，成功构建了重组质粒pET32a-E。重组质粒转化大肠杆菌Rosseta，经IPTG诱导得到了高效表达。Western blot分析表明，重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。将纯化好的DTMUV E蛋白作为包被抗原，建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法。经过条件优化，确定了抗原最适包被浓度为0.093 μg/孔，血清的最佳稀释度为1∶100。批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.53%和9.73%。用建立的ELISA方法对免疫鸭坦布苏病毒灭活疫苗的鸭血清和对照鸭血清进行抗体检测，同时与攻毒保护试验进行比较，两者的阳性符合率为86.67% ，阴性符合率为100%。

鸭坦布苏病毒；JM株；E 蛋白；截断表达；ELISA

鸭坦布苏病毒病是由属于黄病毒科（Flaviviridae）、黄病毒属（Flavivirus）、恩塔亚病毒群的坦布苏病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）感染引起的。该病2010年春季在浙江省、江苏省、上海市等华东地区首次发生，并迅速传播到全国大多数水禽养殖地区，给养鸭业造成巨大损失[1-5]。……