张民秀，谢芝勋，黄 莉，谢志勤，刘加波，谢丽基，邓显文，罗思思，黄娇玲

( 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室，广西南宁 530001)



H9N2亚型禽流感病毒M2e蛋白在原核系统中的表达

张民秀，谢芝勋*，黄 莉*，谢志勤，刘加波，谢丽基，邓显文，罗思思，黄娇玲

( 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室，广西南宁 530001)

以含有全长H9N2亚型AIV M2基因的质粒为模板，经PCR扩增得到M2e基因；利用BglⅡ和BamHⅠ之间互为同尾酶关系，构建顺次连接的多拷贝体M2e，并连接入原核表达载体pGEX-6p-1，构成2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组质粒，并转化至表达宿主菌中；将测序正确的菌液经不同浓度IPTG进行诱导，SDS-PAGE电泳鉴定重组蛋白大小，对蛋白进行可溶性分析；利用Western blot分析5种重组蛋白的反应原性。结果显示，在37℃下，2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组蛋白分别经终浓度为0.25、 0.25、0.5、0.25、0.75 mmol/L的IPTG诱导4 h时，表达量最高；2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组蛋白大小分别为31.7、37.2、42.7、48.2、53.9 ku；对重组蛋白进行可溶性分析显示，5种重组蛋白均以包涵体形式存在；Western blot分析显示，2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组蛋白与鼠抗GST标签的单克隆抗体具有良好的特异性反应，为后期进一步获得高免疫原性蛋白和筛选具有通用免疫原性的重组蛋白奠定基础。

H9N2亚型禽流感病毒；M2蛋白胞外区(M2e)蛋白；重组蛋白

H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype avian influenza virus,H9N2 subtype AIV)的感染引起禽类呼吸道疾病及产蛋量下降乃至死亡，严重危害禽类的健康，给养禽业造成了巨大的经济损失[1]。我国依靠AIV灭活疫苗免疫有效地控制了H9N2亚型AIV的广泛传播。但Pu J等[2]研究显示，近年来，经过常规免疫的鸡群仍然发生H9N2亚型AIV的感染，并且感染病例明显增多，说明目前H9N2亚型AIV疫苗不能给鸡群提供完全而有效的保护力。……