欧云文,马小元,王 俊,丁耀忠,张永光,张 杰*

(1.甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070；2.中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃兰州 730046)



研究论文

猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及反应原性分析

欧云文1,2,马小元2,王 俊2,丁耀忠2,张永光2,张 杰2*

(1.甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070；2.中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃兰州 730046)

研究猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的抗原性，为开发PCV2的检测方法奠定基础。以PCV2 CAU0673毒株的DNA为模板，扩增获得702 bp的目的片段，扩增产物克隆入pET30a(+)原核表达载体，构建pET30a-PCV2-ORF2重组质粒，转入大肠埃希菌BL21(DE3)；在37 ℃以1 mmol/L IPTG诱导表达6 h；采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白，并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性。SDS-PAGE分析表明，该ORF2编码基因在大肠埃希菌中得到表达，蛋白大小约为34 ku；Western blot检测结果表明，该重组Cap蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应，与NA-PRRSV和PPV1血清不发生交叉反应。成功构建了PCV2-ORF2原核表达载体，实现了在大肠埃希菌中的表达，纯化后的复性蛋白具有较好的反应原性，为猪圆环病毒2型检测方法建立或试剂盒的开发奠定了基础。

猪圆环病毒2型；ORF2基因；原核表达；反应原性

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)是无囊膜的、环状、单股负链DNA病毒，为目前已知最小的动物病毒；猪感染该病毒后，导致其免疫机能及生产机能下降，常表现消瘦、黄疸、呼吸急促、咳喘等临床症状，是严重影响国内外养猪业发展的重要病原之一[1]。猪圆环病毒分为两个基因型，即猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)。……