华涛，冯磊，张雪花，唐波，常晨，刘国阳，吴培培，陈丽，张道华*，侯继波*

(1.江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，江苏南京210014;2.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009)

PK-15细胞在微载体悬浮放大培养及PCV2增殖工艺研究

华涛1，2，冯磊1，2，张雪花1，2，唐波1，2，常晨1，2，刘国阳1，2，吴培培1，2，陈丽1，2，张道华1，2*，侯继波1，2*

(1.江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心，农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，江苏南京210014;2.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009)

为建立在生物反应器内微载体逐级放大培养PK-15细胞和增殖PCV2技术。采用分批式培养方法，研究了PK-15细胞在微载体胰酶消化放大悬浮培养及猪圆环病毒2型(PCV2)增殖工艺。结果表明，5 g/L的微载体和高糖DMEM下，采用4.0×105cells/mL的初始接种密度及培养至第2天进行换液操作工艺可以获得最佳的PK-15细胞生长效能。胰酶消化转移将PK-15细胞从1 L反应器放大至3 L反应器，微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛，培养3 d细胞密度可达34.3×105cells/mL。采用感染复数为0.1的接毒比例，细胞接毒后在微载体上传至第3代收获毒液可获得最高的PCV2增殖效价107.25TCID50/mL。为PCV2疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。

PK-15细胞;微载体;消化放大;猪圆环病毒2型;悬浮培养

猪圆环病毒(PCV)发现于1974年，作为PK-15细胞的污染被命名为猪圆环病毒1型(PCV1)，动物试验证明其没有致病性［1］。自20世纪90年代初，由猪圆环病毒2型(PCV2)引起的断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)发现以来，PCV2给世界养猪业带来了巨大的损失，各国政府和养猪企业加大了对猪圆环相关疾病(PCVAD)防治的关注和投入［2］。……