杨玉静，聂瑞强，谢建山,2，范瑞文，许冬梅，董常生

（1山西农业大学动物科技学院，山西太谷 030801；2山西医科大学基础医学院，太原 030001）

小鼠黑素细胞中过表达Oct-1对毛色主效基因的影响

杨玉静1，聂瑞强1，谢建山1,2，范瑞文1，许冬梅1，董常生1

（1山西农业大学动物科技学院，山西太谷 030801；2山西医科大学基础医学院，太原 030001）

【目的】克隆小鼠八聚体结合转录因子1（octamer-binding transcription factor 1，Oct-1）基因序列，探讨八聚体结合转录因子1在小鼠黑素细胞中过表达对毛色主效基因表达的影响及在毛色形成中的作用。【方法】使用实验室冻存的第5代小鼠黑素细胞，通过普通PCR方法用引物以小鼠黑素细胞cDNA为模板克隆Oct-1基因cDNA序列， 构建小鼠Oct-1克隆载体和真核表达载体；通过KEGG PATHWAY、NCBI、Transfec等软件对获得的序列进行生物信息学分析；在细胞水平通过细胞转染技术过量表达小鼠Oct-1；转染后使用荧光显微镜观察细胞转染效率，采用分光光度计对小鼠黑素细胞中黑色素含量进行测定，并进行Real-time PCR实验检测转染后黑素细胞中毛色主效基因在mRNA水平表达量的变化，Western blot实验检测转染后细胞中MITF、TYR、TYRP-1和TYRP-2蛋白水平的变化。【结果】经测序和拼接最终获得长度为2 313 bp的小鼠Oct-1基因的cDNA 序列；成功构建真核表达载体， 载体上连有小鼠黑素细胞特异性TYRP-2基因启动子和一个启动报告基因绿色荧光蛋白；通过KEGG PATHWAY 分析获得与毛色形成有关的34个候选基因，NCBI查找出34各个基因的启动子，由Transfec启动子分析软件找出Oct-1可以调节的毛色主效基因；细胞转染后，在荧光显微镜下可观察到黑素细胞带有绿色荧光说明转染效率明显；……