气相色谱法测定复方樟脑醑中樟脑、薄荷脑、苯酚的含量

2017-04-07杨跃龙龚力民李菁

中国当代医药 2017年6期

杨跃龙++++龚力民++++李菁+++++黄绍国

[摘要]目的建立气相色谱法测定复方樟脑醑中樟脑、薄荷脑、苯酚的含量的方法。方法采用KB-WAX型毛细管柱（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）；载气为氮气，流速：3.0 ml/min；氢火焰离子化检测器（FID）程序升温，初始温度为130℃，保持10 min，以5℃/min 的速率升温至230℃，保持5 min；进样口温度：200℃；检测器温度：250℃，外标法测定。结果樟脑、薄荷脑、苯酚能很好分离。樟脑、薄荷脑、苯酚的线性范围分别为0.2029～1.6232 mg/ml （r=0.9993，n=9），0.1964～1.5712 mg/ml（r=0.9995，n=9），0.2074～1.6592 mg/ml （r=0.9999，n=9），平均回收率分别为99.43%（RSD=0.85%）、101.85%（RSD=0.84%）、101.45%（RSD=0.53%）。结论该方法操作简便，灵敏度高，重现性好，可用于复方樟脑醑中樟脑、薄荷脑、苯酚的含量测定。

[关键词]气相色谱法；复方樟脑醑；樟脑；薄荷脑；苯酚

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）02（c）-0096-04

Content determination of camphor，menthol and phenol in compound spiritus camphorae by gas chromatography

YANG Yue-long1 GONG Li-min2 LI Jing3▲ HUANG Shao-guo2▲

1.Huaihua Institute for Food and Drug Control in Hunan Province，Huaihua 418000，China；2.School of Pharmacy，Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410208，China；3.Hunan Medical College，Huaihua 418000，China

[Abstract]Objective To establish a method for the content determination of camphor，menthol and phenol in compound spiritus camphorae by gas chromatography.Methods The capillary column in KB-WAX type （30.00 m×0.32 mm×0.25 μm） was used.Nitrogen was selected as the carrier gas with a flow rate of 3.0 ml/min.The programmed-temperature conditions by flame ionization detector （FID） were to start at the initial temperature of 130℃ and keep for 10 min；to rise the temperature to 230℃ at 5℃/min and keep for 5 min.The inlet temperature was 200℃ and the temperature of detector was 250℃.It was determined by the external standard method.Results Camphor，menthol，phenol could be easily separated.The linearity ranges of camphor，menthol，and phenol were 0.2029-1.6232 mg/ml（r=0.9993，n=9），0.1964-1.5712 mg/ml（r=0.9995，n=9），and 0.2 074-1.6 592 mg/ml respectively.The average recoveries were 99.43%（RSD=0.85%），101.85%（RSD=0.84%） and 101.45%（RSD=0.53%） respectively.Conclusion The method is simple and easy to perform，high in sensitivity，and good in reproducibility，which can be used for the content determination of camphor，menthol and phenol in compound spiritus camphorae.

[Key words]Gas chromatography；Compound spiritus camphorae；Camphor；Menthol；Phenol复方樟脑醑是临床长期使用的一种疗效优良的医院制剂，其主要成分为樟脑、薄荷脑、苯酚，具有局部止痒的功效。用于治疗急、慢性皮炎。原质量标准较简单，没有对其中的有效成分樟脑、薄荷脑与苯酚进行定量检测，无法控制药品质量，从而无法保证药品疗效。为有效控制本品质量，根据本制剂的特点及其有效成分易挥发的特性，本实验参考相关文献[1-8]用气相色谱法同时测定复方樟脑醑中樟脑、薄荷脑与苯酚的含量，现报道如下。

1仪器与试药

安捷倫7820A气相色谱仪（安捷伦公司、自动进样器、FID检测器）；电子分析天平（梅特勒-托利多国际股份有限公司，型号：AB135-S）。

樟脑（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110747-201409；纯度：98.7%），薄荷脑（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110728-200509），苯酚（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：100509-201203；纯度：100.0%），乙醇（天津化学试剂研究所，色谱纯），水为超纯水（科室自制）。复方樟脑醑（湖南省怀化市第一人民医院，批号：140624、140625、140626）。

2 方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：KB-WAX型石英毛细管柱（30.00 m×0.32 mm×0.25 μm）；载气：氮气；流速：3.0 ml/min；柱温：程序升温，初始温度为130℃，保持10 min，以5℃/min 的速率升温至230℃，保持5 min；进样口温度：200℃；检测器：氢火焰离子化检测器（FID）；检测器温度：250℃；进样量：1 μl；分流比：10∶1[9-12]。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取樟脑对照品、薄荷脑对照品、苯酚对照品约20 mg，置20 ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

精密量取本品5 ml，置100 ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4阴性样品溶液的制备

原方去掉樟脑、薄荷脑、苯酚后，按处方比例，照本品制备工艺制备阴性样品。精密量取阴性样品5 ml，置100 ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为阴性样品溶液。

2.5系统适用性

按“2.1”项下色谱条件下测定，樟脑、薄荷脑、苯酚保留时间分别为5.2、7.0、17.5 min，分离度均大于3.0，表明该色谱条件下系统适用性良好。

2.6 精密度试验

取同一批复方樟腦醑样品（批号：140624）按样品含量测定方法配制1份，连续进样6次，进样量为1 μl，记录峰面积，结果樟脑、薄荷脑、苯酚的RSD分别为0.41%、0.39%、0.36%。试验结果表明，该方法进样精密度良好。

2.7 方法专属性考察

取阴性样品溶液，精密吸取续滤液1 μl，注入色谱仪，按“2.1”色谱条件下，记录色谱图，见图1。试验结果表明，阴性样品溶液在樟脑、薄荷脑、苯酚相应位置无吸收峰出现，表明该方法专属性良好。

2.8 线性关系考察

精密称取樟脑对照品51.40 mg、薄荷脑对照品49.10 mg、苯酚对照品51.85 mg置25 ml量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。分别精密量取对照品储备液1.0、2.0、5.0、6.0、8.0 ml置10 ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述对照品溶液1 μl注入气相色谱仪，记录色谱图，以峰面积（A）为横坐标X，浓度（C）为纵坐标Y，绘制标准曲线[13-16]。得樟脑回归方程：Y=0.000 021 7X-0.034 008 88，r=0.9991；薄荷脑回归方程：Y=0.000 022 3 X-0.035 830 19，r=0.9992；苯酚回归方程：Y=0.000 021 9 X-0.033 0571 1，r=0.9995；试验结果表明，樟脑浓度在0.2029～1.6232 mg/ml（r=0.9993，n=9），薄荷脑浓度在0.1964～1.5712 mg/ml（r=0.9995，n=9），苯酚浓度在0.2074～1.6592 mg/ml（r=0.9999，n=9）内峰面积与浓度线性关系良好。

2.9 重复性试验

取同一批复方樟脑醑样品（批号：140624）按样品含量测定方法配制6份，按照上述色谱条件测定，分别进样1 μl，注入色谱仪，记录色谱图。按回归方程计算樟脑、薄荷脑、苯酚的含量，结果RSD分别为0.18%、0.32%、0.34%。试验结果表明，该方法重复性良好。

2.10稳定性试验

取同一批复方樟脑醑样品（批号：140624）按样品含量测定方法配制6份，分别在0、2、4、8、12、24 h进样1 μl，记录峰面积，结果樟脑、薄荷脑、苯酚的RSD分别为0.36%、0.43%、0.42%。试验结果表明，本品溶液在放置24 h后测定，樟脑、薄荷脑、苯酚的峰面积基本无变化，表明溶液在24 h内稳定。

2.11中间精密度试验

另一实验员第2天使用另一台仪器，精密量取同一批号样品6份，按照“2.3”项下的制备方法制备供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件下进行测定，结果樟脑、薄荷脑、苯酚的RSD分别为0.60%、0.42%、0.50%。试验结果表明，该方法中间精密度良好。

2.12准确度试验

分别精密量取9份已知含量的样品（批号：140624）约0.5 ml置20 ml量瓶中，平均分成3组，分别各加入混合对照品溶液（樟脑9.6805 mg/ml、薄荷脑9.7870 mg/ml、苯酚9.1980 mg/ml）0.8、1.0、1.2 ml，用乙醇稀释至刻度，摇匀。按上述气相色谱条件，分别量取1 μl注入气相色谱仪，记录色谱图，计算回收率，结果见表1～3。试验结果表明，该方法回收率良好。

2.13 样品含量测定结果

取3批不同批号的样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定，见表4。

3讨论

樟脑、薄荷脑、苯酚，具有局部止痒剂的功效，用于治疗急、慢性皮炎，是复方樟脑醑中的有效成分，故本法选择同时测定复方樟脑醑中樟脑、薄荷脑与苯酚的含量。由于本品为含乙醇的液体制剂，结合被测物质的性质，试验中比较乙醇、乙酸乙酯两种稀释溶剂，结果乙酸乙酯溶液略显混浊，而乙醇则能将样品溶液完全溶解，故最后选择毒性较小的无水乙醇作为稀释溶剂。

试验过程中曾分别尝试使用极性柱、中等极性柱和非极性柱进行样品峰分离，结果发现在极性柱（KB-WAX）中樟脑、薄荷脑、苯酚保留时间分别为5.2、7.0、17.5 min，分离效果好，能达到试验目的，故选用极性柱（KB-WAX）进行试验。在试验中曾参考相关文献[7-17]采用恒温125℃、135℃、145℃、160℃和多种程序升温方法，结果以初始温度为130℃，保持10 min，以5℃/min 的速率升温至230℃，保持5 min，三组分取得很好的分离效果，满足系统适应性试验要求，故采用此程序升温进行含量测定。利用样品与对照品保留时间一致，还可以同时对樟脑、薄荷脑、苯酚进行气相色谱鉴别。

本试验采用气相色谱法同时对其挥发性成分樟脑、薄荷脑、苯酚进行含量测定，更能客观地反映该复方制剂的质量，而且该结果证明了本法简便快速，重复性良好，回收率高，建议可为复方樟脑醑的质量控制提供检测的新方法。

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