费中杰

（扬州大学兽医学院研究生，江苏扬州 225001）

新城疫基因工程疫苗的研究进展

费中杰

（扬州大学兽医学院研究生，江苏扬州 225001）

新城疫（Newcastle disease，ND）是一种烈性病毒性家禽传染病，曾被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病。本病自1926年首次发现以来，已经在世界范围内多次流行，给养禽业造成了巨大的经济损失[1]。免疫接种是控制ND的主要手段。目前常用的有弱毒疫苗、中等毒力疫苗和灭活疫苗等常规疫苗，虽然商品鸡群多次进行免疫接种，但由于环境中强毒的存在，仍有可能感染新城疫病毒，造成ND以不同的形式发生和流行。为了弥补常规疫苗的不足，国内外一些实验室从20世纪80年代末开始研制ND基因工程疫苗，在DNA疫苗、亚单位疫苗和活载体疫苗等方面都进行了有益的探索。在重组活载体疫苗研究中，NDV主要免疫保护性抗原F和HN已在多种载体系统中得到表达。

新城疫；疫苗；研究

1 DNA疫苗

在DNA疫苗研究方面，日本学者Sakaguchi等[2]将NDV F基因插入质粒载体，在巨细胞病毒早期增强子和鸡β肌动蛋白启动子的调控下，构建了线性质粒以及线性质粒与脂质体转染剂的混合物，他们都能诱导高水平的针对F蛋白的抗体，而闭环状的质粒不能产生抗体。姜永厚等[3]构建了共表达鸡IL-2和ND F基因的重组真核质粒，用该共表达质粒比将单表达IL-2基因的质粒和单表达F基因的质粒混合使用的方法要更进一步，为DNA疫苗的应用提供了极大便利。免疫接种时，一针注射即可完成，而不需分别注射2种质粒。

2 亚单位疫苗

亚单位疫苗是将NDV保护性抗原基因在原核或真核系统中表达所获得的产品制成的疫苗。杆状病毒载体系统是研制ND亚单位苗的重要工具，它是以昆虫杆状病毒为载体插入外源基因，以昆虫和昆虫细胞为受体的表达系统。Luckow等[4]创建了一种全新的杆状病毒表达系统，称为Bac-to-Bac系统，其构建和筛选方法简单，阳性重组率高，是目前最好的杆状病毒表达系统。

3 反向遗传重组疫苗

反向遗传操作技术是通过构建RNA病毒的感染性分子克隆，在DNA分子水平上对其进行体外操作，从而研究病毒结构与功能的方法。

La Sota免疫组在排毒高峰时的病毒量为基因VII型弱毒株免疫组的10倍以上[5]。目前以该致弱毒种为基础毒种制备的灭活疫苗正在新兽药注册审批中。

4 活载体疫苗

4.1 以马立克疫苗病毒为载体

火鸡疱疹病毒（HVT）是最近发展起来的病毒载体，优点是对鸡及其它动物均无致病性，使用安全，接种鸡体后病毒可在鸡体内形成长达数周的病毒血症，且终生潜伏感染。目前，HVT已成为国内外研究家禽疫苗的重要病毒载体。Sakaguchi等[6]将F基因插入到血清1型马立克病毒（MDV1）US10基因内，以SV40启动子构建了重组1型马立克氏病毒（rMDV1）。陈溥言等[7]在HVT FC126株中表达了NDV Miyadera株的HN基因。后来又将新城疫病毒F48E9株的F基因克隆到包含火鸡疱疹病毒HVT非必须片段载体PTK2B中，成功的构建了含有F基因表达盒的HVT转移质粒载体PTK3F，为进一步在细胞中转染并获得表达F基因的HVT重组病毒奠定了基础。

4.2 以鸡痘病毒为载体

新城疫病毒和鸡痘病毒（FPV）是影响家禽业较为严重的两种疫病。预防这两种病的疫苗也用了数十年，对促进养禽业的发展功不可没。因此，以鸡痘病毒为载体构建表达ND基因的疫苗可以起到一举两得的作用。

目前，家禽上几个重大的病毒传染病如新城疫（ND）、禽流感（AI）、传染性法氏囊病（IBD）、马立克病（MD）、鸡传染性支气管炎（IB）、鸡传染性喉气管炎（ILT）等保护性抗原基因都已在鸡痘病毒上在获得表达，国内外已有ND、AI、ILT 重组鸡痘病毒已获得注册，作为商品化的疫苗使用[8]。

利用FPV作载体构建表达不同毒株NDV的HN和F蛋白的重组活疫苗是近十年来研究的热点。Taylor等[9]发现，表达F蛋白的重组鸡痘病毒的保护率因接种途径而异，其中点眼或口服可提供部分保护，肌肉注射或翅蹼接种均可提供100%保护。Edbauer等构建的表达HN基因的重组鸡痘病毒，一次接种或二次接种均可提供100%保护力，而点眼途径仅能提供10%的保护率和30%的保护率。

综上所述，以鸡痘病毒为载体研制的NDV重组疫苗与传统的疫苗相比，具有高效、安全等优点，可同时预防鸡痘和新城疫。从免疫检测的角度考虑，用表达F或HN蛋白的重组苗免疫后，可根据是否产生其他蛋白抗体来鉴别鸡群感染的是疫苗毒还是野毒，此外，在FPV中表达多种外源基因的重组苗，可达到优化免疫程序，减少应激，降低成本，显示重组活载体疫苗更大的优势。

[1]Alexander D J. Newcastle disease and other avian Paramyxoviridae infections [M]. Ames：Iowa State University Press，1997：541-569.

[2]Sakaguchi M，Nakamura H，Sonoda K，et al. Protection of chickens from Newcastle disease by vaccination with a linear plasmid DNA expressing the F protein of Newcastle disease virus [J].Vaccine，1996，14（8）：747-752.

[3]姜永厚，陈奖励，宋秀龙，等.鸡新城疫病毒F和鸡IL-2重组DNA疫苗的构建[J].中国预防兽医学报，2001，23（2）：81-84.

[4]Luckow V A，Lee S C，Barry G F，et al. Efficient generation of infectious recombinant baculoviruses by site-specific transposonmediated insertion of foreign genes into baculovirus genome propagated in Escherichia coli [J].J Virol，1993，67（8）：4566-4579.

[5]Hu S，Ma H，Liu X，et al. A vaccine candidate of attenuated genotype Ⅶ Newcastle disease virus generated by reverse genetics [J].Vaccine，2009，27（6）：904-910.

[6]Sakaguchi M，Nakamura H，Sonoda K，et al. Protection of chickens with or without maternal antibodies against both Marek’s and Newcastle diseases by one-time vaccination with recombinant vaccine of Marek’s disease virus type 1 [J].Vaccine，1998，16（5）：472-479.

[7]赵军，张秀根，陈溥言，等.表达鸡新城疫病毒HN基因的重组火鸡疱疹病毒的构建[J].畜牧兽医学报，2000，32（2）：150-154.

[8]甘军纪，彭大新，刘秀梵.重组禽痘病毒疫苗研究进展[J].畜牧与兽医，2012，44（10）：97-101.

[9]Taylor J，Edbauer C，Rey-Senelonge A，et al. Newcastle disease virus fusion protein expressed in a fowlpox virus recombinant confers protection in chickens[J].J Virol，1990，64（4）：1441-1450.