王仁广+张蕊多+石薇+王畅+邱智东+贾艾玲

【摘要】目的：利用高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质（HPLC-Q-TOF-MS/MS）聯用技术研究人参复方制剂降脂保肝颗粒中人参与山楂等药材共提前后皂苷类成分的变化。方法：采用ZORBAX SB-Aq色谱柱（250mm×46 mm，5μm），流动相以乙腈-水梯度洗脱，负离子模式采集质谱数据，比较不同提取方法及配伍制备的共提液中皂苷类成分的变化趋势。 结果：在pH小于3时，人参与山楂等不同配伍共提液中皂苷类成分水解，发生转化，稀有皂苷的含量明显增加。结论：在人参与山楂配伍提取过程中酸性对皂苷成分的影响较大，可为人参皂苷在酸性条件下更准确的应用提供理论基础。

【关键词】人参；山楂；高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱；共提取；人参皂苷

【中图分类号】R284【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）06-0025-04

中药复方配伍理论及变化规律是中医药理论研究的热点。中药复方疗效的发挥与其中的活性成分或活性成分群的发挥作用密切相关。复方在发挥各药药理综合作用的同时，多药共提过程中不同物质充分反应，可能发生增溶及化学成分的变化，从而产生特殊的药效活性。药对，是指药物间最基本的配伍形式，是组成方剂的基本要素，有时也是最简单的方剂，其临床应用也一直被广泛研究[1-5]。降脂保肝颗粒是白求恩医科大学制药厂联合长春中医药大学与吉林大学共同研发的具有治疗脂肪肝作用的中药六类新药。是由水飞蓟、人参、山楂、丹参等四味中药组成的复方制剂。人参是我国常用中药之一，为五加科植物人参 （Panax ginseng CAMey） 的干燥根和根茎。人参的主要有效成分为人参皂苷类物质，其中主要活性成分人参皂苷Rg1、Rb1、Re是《中国药典》2015版规定的人参药材含量测定指标[6]。据文献报道，人参皂苷低剂量对慢性肝损伤有一定保护作用，人参皂苷高剂量能明显减少肝组织胶原的沉积，改善肝纤维化程度，具有抗肝纤维化作用[7-9]。山楂为药食同源的植物，主要具有调节血脂、保肝、降压、助消化等作用，应用十分广泛[10]。文献报道，山楂有效成分主要有黄酮类、黄烷及其聚合物类、有机酸类、三萜类等[11]。其中山楂的黄酮类成分如金丝桃苷、熊果酸具有明显的降低胆固醇、调节血脂的作用[12-13]。人参山楂配伍组方可以增强降脂保健作用。人参与一些中药共煎后人参皂苷会发生变化。如人参与黄连共煎时，黄连提供的中碱性条件使人参皂苷类成分水解生成齐墩果酸型苷元[14-16]。本研究用高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱（HPLC-Q-TOF-MS/MS）联用考察人参在与山楂共提过程中人参皂苷类成分的变化，为人参-山楂配伍组合的药效物质基础研究提供理论依据。[JP]

1仪器与材料

11仪器Agilent1260 高效液相色谱仪；Agilent 6520Q-TOF 质谱仪（美国Agilent公司）；TG328A（S）分析天平（北京斯达恒通科技有限公司）；TP-150 超声波清洗机（天鹏电子新技术有限公司）；真空干燥箱（上海-恒实验仪器总厂）。

12材料[JP+1]人参、山楂、水飞蓟、丹参均购自于吉林国安药业有限公司，经长春中医药大学药学院中药资源与鉴定教研室翁丽丽教授鉴定，分别为五加科植物人参 Panax ginseng 的干燥根；蔷薇科植物山楂Crataegus pinnatifida Bge的干燥成熟果实，；菊科植物水飞蓟Silybum marianum（L）Gaertn的干燥成熟果实；唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根和根茎。人参皂苷Rg1、Rb1、Re对照品（批号分别为110703-201529、110704-201424、110754-201525）。无水乙醇为分析纯（北京化工厂）；乙腈、甲酸均为色谱纯（美国Thermo Fisher公司）；水为纯净水（娃哈哈公司）。[JP]

2方法与结果

21液质-联用（LC-MS）条件

211色谱条件选用ZORBAX SB-Aq色谱柱（250mm×46mm，5μm）；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1中的程序进行梯度洗脱，进样量10μL，流速1mL /min。

压力为207 kPa；干燥气（N2）流速：10L/min；干燥气温度：350℃；毛细管电压：3500V；碎裂电压：175 V；锥孔电压：65V；质量检测范围：300～1400m/z。

22供试品溶液的制备

221降脂保肝颗粒称取降脂保肝颗粒适量，研细，取粉末1g，精密加入10mL石油醚（60～90℃），超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，滤过，弃去滤液，药渣挥干溶剂，精密加入10mL甲醇，超声处理30min，滤过，取续滤液，过022μm微孔滤膜，即得。

222人参单煎液称取人参药材10g，水煎1h，药液过滤之后加醇使之含醇量达到75%，过滤，过022μm微孔滤膜，即得。

223人参-山楂合煎液称取人参药材10g与山楂药材20g合并水煎1h，药液过滤之后加醇使之含醇量达到75%，过滤，过022μm微孔滤膜，即得。

224人参-山楂与醇提后的丹参-水飞蓟药渣合煎液称取人参10g，山楂20g，与醇提后的丹参药渣15g，水飞蓟药渣10g合并水煎1h，药液过滤之后加醇使之含醇量达到75%，过滤，过022μm微孔滤膜，即得。

225[JP2]人参-山楂超声醇提液称取人参10g，山楂20g，用75%乙醇超声提取（功率250W，频率40kHz），药液过滤，过022μm微孔滤膜，即得。[JP]

226人参-山楂与醇提后的丹参-水飞蓟药渣超声醇提液取人参药材10g，山楂20g，醇提后的丹参药渣15g，水飞蓟药渣10g，用75%乙醇超声提取（功率250W，频率40kHz），药液过滤，过022μm微孔滤膜，即得。

3讨论

研究降脂保肝颗粒工艺时，根据药物成分的性质等要求选择水飞蓟、丹参以乙醇提取，药渣与人参、山楂合并水煎煮。由于人参是君药，故前期考虑将人参皂苷作为制剂质量标准控制指标，但由于山楂中含有酸性物质，在煎煮过程中可能会对人参皂苷类成分的檢测产生影响，故通过实验展开研究。

由图1～6和表2可知，图1降脂保肝颗粒样品液质联用色谱中无Rg1、Re峰出现，其他样品中，pH值对人参皂苷Rg1与Re的峰面积影响较大；图2中，人参单煎可以检出Rg1与Re；图3即人参山楂合煎样品的pH小于3，Rg1与Re的峰面积大幅度减少，但其中48～50min位置出现了一些稀有皂苷色谱峰，说明人参皂苷进行了转化；图4中，加入的醇提后的药渣共煎起到了一种缓冲体系作用，使药液酸性强度减小，Rg1与Re转化程度相对较小。图5和图6采用的超声处理方法，pH均为44，Rg1与Re转化程度较小。

人参与不同中药配伍，煎煮液的pH 值会随着配伍中药的不同而改变，从而影响人参皂苷的溶出和种类的变化。当pH小于3时，人参皂苷会进行转化。理论上在酸性条件下加热，人参二醇型皂苷、人参三醇型皂苷、齐墩果酸型皂苷会发生转化，生成人参二醇、人参三醇、齐墩果酸[17-19]。由实验结果显示出，药液中Rg1、Re含量很低，几乎全部转化，但仍可在液质联用中检测出。分析皂苷成分可能是在加入醇提液后浓缩、干燥过程中发生了变化。药液在浓缩过程中受热时间过长，加之酸性的影响，皂苷可能会转化。但若尝试在浓缩前调节药液pH值，则会影响酸性有效成分的保留。因此，通过实验研究得出，降脂保肝颗粒在质量标准研究时不建议将测定人参中的人参皂苷等指标性成分列入标准。人参、山楂两味中药广泛用于多种中药复方中，具有协同作用。研究为人参与山楂配伍进一步研究提供了一定的实验依据，可以为中药复方制剂分析、中药组方原理研究及临床治疗药物检测提供一些理论参考。

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（收稿日期：2017-01-12编辑：穆丽华）