(南通大学实验动物中心，江苏南通226001)

斯氏艾美耳球虫感染兔血常规及肝脏功能分析

宋鸿雁，景瑾，蒋荧梅，邵义祥

(南通大学实验动物中心，江苏南通226001)

为了对斯氏艾美耳球虫感染兔的血常规、肝功能和凝血4项进行检测分析。通过孢子化的斯氏艾美耳球虫卵囊口服接种的途径感染8只2月龄的无球虫新西兰兔，8只不感染的设为阴性对照组。感染30 d后，心脏采血采集血液样本，测量血常规、肝功能和凝血4项等血液指标。血液检测结果显示，与肝功能相关的8项指标中，仅有谷氨酰肽转移酶、血清胆碱酯酶差异显著，其余均差异极显著，血常规和凝血4项亦差异极显著。表明兔感染斯氏艾美耳球虫1个月后肝功能严重受损。

斯氏艾美耳球虫;新西兰兔;血常规;肝功能;凝血4项

兔是主要的经济动物，也是重要的实验动物之一，其质量关系到以兔为实验对象的生物医学研究结果、生物医药产品安全性评价结果的准确性、可靠性，也影响到兔相关制品的质量和安全性。然而兔球虫病严重影响家兔的生长和健康，是养兔业发展的巨大威胁。据文献报道，实验兔普遍感染球虫，宋鸿雁等［1］对几个主要实验兔供应基地进行了流行病学调查，结果显示，被调查的实验兔场球虫感染率为100%，且均为混合感染。

斯氏艾美耳球虫(E．stiedai)是目前发现的兔球虫中致病力强、危害大的一种球虫，主要侵害兔肝脏胆管上皮细胞，引起严重的肝球虫病，在临床上以腹泻、生长缓慢、消瘦为主要特征，甚至造成兔大批死亡。肝脏具有新陈代谢、合成蛋白、生物转化等重要功能，是机体最大的解毒器官，肝脏一旦病变会造成一系列严重的影响。

本试验通过孢子化的斯氏艾美耳球虫卵囊口服感染无球虫新西兰兔，分析比较未感染斯氏艾美耳球虫的新西兰兔和感染的新西兰兔血常规、肝功能和凝血4项等血液指标，来研究斯氏艾美耳球虫对兔的致病性，为探索兔球虫病的诊断与预防提供理论依据。

1 材料与方法

1．1 实验动物普通级新西兰兔16只，雌雄不拘，2月龄，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供，实验动物使用许可证号:SYXK(苏)2012－0030，饲养在南通大学实验动物中心标准化的代养观察室内，饲养笼具全部经火焰喷烧处理(单笼饲养)，自由采食饮水。

1．2 主要仪器全自动血细胞分析仪(950FS)，美国Drew Scientific公司生产;全自动生化分析仪(日立7600型)，珠式会社日立高新技术生产;MC-4000全自动血凝分析仪，德国美创生产。

1．3 无球虫兔的培育健康的两月龄的新西兰兔16只，在饮水中加入地克珠利、盐酸氯苯胍等抗球虫药物，自由采食和饮水。每天收集兔粪，用饱和食盐水漂浮法检查球虫卵囊，直至查不到卵囊为止。停药4周后，再检查球虫卵囊，连查1周，均没有检测到卵囊为无球虫兔。

1．4 实验兔的感染8只新西兰兔经口接种斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊1×105/只，8只阴性对照兔在相邻房间按相同条件饲养，接种1周后，每天检测粪便，直至发现卵囊。

1．5 全血的采集接种30 d后，心脏采血法每只兔子采血6 mL，其中2 mL EDTAK2抗凝检测血常规;2 mL肝素抗凝检测肝功能;2 mL枸橼酸钠抗凝检测凝血4项。

1．6 实验兔血液指标检测2 mL EDTAK2抗凝的全血，经全自动血细胞分析仪测定白细胞(WBC)、淋巴细胞(LY)、嗜酸性粒细胞(EOS)、血小板(PLT)等血常规指标。2 mL肝素抗凝的全血经全自动生化分析仪测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰肽转移酶(GGT)、血清胆碱酯酶(ChE)等肝功能指标的含量。2 mL枸橼酸钠抗凝的全血经全自动血凝仪测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)。

1．7 数据处理分析所有试验计量数据均采用STATA V 10．0统计学软件进行处理。数据结果用珔X±SD表示，对照组与试验组的样本均数比较采用配对t检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 血常规检测结果与阴性对照组相比，WBC、LY、EOS在感染斯氏艾美耳球虫的实验兔的外周血中含量极显著高于对照组的实验兔，差异有统计学意义(P＜0．01);PLT的含量则极显著低于对照组的实验兔，差异有统计学意义(P＜0．01)，见表1。

表1 对照组和感染组实验兔血常规指标

表1 对照组和感染组实验兔血常规指标

注:与对照组相比，*P＜0．05，＊＊P＜0．01，下表同

2．2 肝功能检测结果与阴性对照组相比，ALT、AST、T-BIL、LDH、ALP在感染斯氏艾美耳球虫的实验兔的外周血中含量极显著高于对照组的实验兔，差异有统计学意义(P＜0．01);GGT的含量显著高于对照组的实验兔，差异有统计学意义(P＜0．05); ALB的含量极显著低于对照组的实验兔，差异有统计学意义(P＜0．01);ChE的含量显著低于对照组的实验兔，差异有统计学意义(P＜0．05)，见表2。

表2 对照组和感染组实验兔肝功能指标

表2 对照组和感染组实验兔肝功能指标

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2．3 凝血4项检测结果与阴性对照组相比，PT、APTT、TT在感染斯氏艾美耳球虫的实验兔的外周血中含量极显著高于未感染球虫的实验兔，差异有统计学意义(P＜0．01);FIB的含量极显著低于对照组的实验兔，差异有统计学意义(P＜0．01)，见表3。

表3 对照组和感染组实验兔凝血4项指标

表3 对照组和感染组实验兔凝血4项指标

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3 讨论

肝脏是人体内脏中最大的实体器官，也是拥有最多功能的器官，包括合成酶、消化解毒、过滤净化血液、调节血糖等等［2］。肝脏对来自体内和体外的许多非营养性物质如各种药物、毒物以及体内某些代谢产物，具有生物转化的作用，可通过新陈代谢将它们彻底分解或以原形排出体外。若肝脏功能受到损伤，则会使各种代谢、消化功能紊乱，体内毒素增加，从而影响机体的生长发育。此外，肝脏与机体凝血功能的正常发挥也有着密切的关系，能够调节机体的凝血、抗凝与纤溶之间的动态平衡［3］，对人体凝血系统的完整性起到了重要的保证作用。血液中各种成分能比较客观的反映机体的指标，虽然国内已经建立了兔血液学参数标准，但由于不同的目的，需要不同日龄及体重的兔，以及地理环境的不一样，其血液学参数指标可能有一定的差异［4］。

肝脏功能出现问题的一个重要指标是ALT的升高，是肝脏有炎症或肝细胞受损的重要指标［5］。AST广泛存在于机体组织细胞中，有研究表明，AST活性随肝细胞损伤的程度而升高。ALT和AST在正常血浆中含量很低，且含量比较稳定。当肝脏合成蛋白质的能力下降时，ALB会发生量和质的变化，并且ALB越低，说明病情越严重［6］。此外，在临床诊断中最普遍的生理指标便是LDH、ALP、GGT、ChE，这些指标的变化均能说明肝脏功能有不同程度的损伤。本试验中斯氏艾美耳球虫侵入肝脏，这些生理指标均有显著变化，说明斯氏艾美耳球虫对实验兔肝脏造成了极大的损伤。

在血常规中，白细胞是人体与疾病斗争的“卫士”，具有吞噬异物并产生抗体，抗御病原体入侵等能力［7］。嗜酸性粒细胞是白细胞的一部分，占白细胞总数的0．5%～5%，在寄生虫侵入时极为敏感。在过敏反应、寄生虫感染和其他免疫反应中嗜酸性粒细胞(EOS)极为活跃［8］，嗜酸性粒细胞显著上升。血小板起到十分重要的凝血作用，而血小板的减少会极大的影响患者机体的凝血功能。本试验中，白细胞和嗜酸性粒细胞显著上升，而血小板显著下降，凝血4项进一步分析结果表明，实验组和对照组各项指标均存在极显著差异。

肝脏与机体凝血功能的正常发挥有着密切的关系，能够调节机体的凝血、抗凝与纤溶之间的动态平衡，对人体凝血系统的完整性起到了重要的保证作用［9］。肝细胞为人体合成大量的凝血因子以及抗凝物质和纤溶酶原［10］。当肝功能受损时，表现多种凝血功能缺陷［3］，引起蛋白合成减少而造成的凝血障碍以及凝血因子缺乏而造成的凝血时间延长。人体内14种凝血因子中有12种由肝脏参与合成，肝细胞受到严重损害时，肝细胞大量坏死，蛋白合成能力下降，也使得凝血因子的合成逐渐减少。本试验中斯氏艾美耳球虫侵入肝脏，由正常肝细胞合成、分泌到血液中的各种凝血因子显著减少，引起PT、APTT、TT延长，纤维蛋白质(FIB)下降，血小板显著下降。

本试验分析比较了对照组和感染斯氏艾美耳球虫的实验兔的血常规、肝功能和凝血4项等血液指标。结果显示，血常规中感染组的WBC、LY、EOS极显著上升，PLT极显著下降;肝功能中感染组的ALT、AST、T-BIL、LDH、ALP极显著增高，GGT显著上升，ALB极显著下降，ChE显著下降;凝血4项中感染组的PT、APTT、TT极显著增高，FIB极显著减少。这些结果均说明斯氏艾美耳球虫对兔的危害极大，严重制约养兔业的发展，深入研究兔球虫病尤其是斯氏艾美耳球虫病对机体功能的影响，探讨早期诊断、预防控制与治疗措施有着重要的理论意义和实用价值。

［1］宋鸿雁，朱顺星，刘春，等．江苏省实验兔球虫感染情况调查研究［J］．动物医学进展，2012，33(12):88-91．

［2］Chu M J J，Hickey A J R，Tagaloa S，et al．Ob/ob Mouse Livers Show Decreased Oxidative Phosphorylation Efficiencies and Anaerobic Capacities after Cold Ischemia［J］．PLOS ONE，2014，9(6): 1-10．

［3］Lisman T，Caldwell S H，Burroughs A K，et al．Hemostasis and thrombosis in patients with liver disease:the ups and downs［J］．Hepatol，2010，53(2):362-71．

［4］潘永全，韩志刚，王胜，等．不同日龄新西兰兔血液学部分参数观察［J］．医学动物防制，2004，20(1):20-23．

［5］Long H Nguyen，David Chao，Joseph K Lim，et al．Histologic Changes in Liver Tissue From Patients With Chronic Hepatitis B and Minimal Increases in Levels of Alanine Aminotransferase:A Metaanalysis and Systematic Review［J］．Clinical Gastroenterology and Hepatology，2014，12(8):1262-1266．

［6］Makroo R N，Walia R S，Aneja S，et al．Preoperative predictors of blood component transfusion in living donor liver transplantation［J］．Asian J Transfus Sci，2013，7(2):140-146．

［7］Julie Lasselin，Javaid-ur Rehman，Torbjornkerstedt，et al．Effect of long-term sleep restriction and subsequent recovery sleep on the diurnal rhythms of white blood cell subpopulations［J］．Brain，Behavior，and Immunity，2015，47(s1):93-99．

［8］Jeronimo S M B，Duggal P，Braz R F S，et al．An emerging peri-urban pattern of infection with Leishmania chagasi，the protozoan causing visceral leishmaniasis［J］．Scandinavian Journal of Infectious Diseases，2004，36(6-7):443-449．

［9］Patrick G，Northup，Stephen H，et al．Coagulation in Liver Disease: A Guide for the Clinician［J］．Clinical gastroenterology and hepatology，2013，11(9):1064-1074．

［10］Anna K．Kopec，James P．Luyendyk．Coagulation in liver toxicity and disease:Role of hepatocyte tissue factor［J］．Thrombosis Research，2014，133(1):S57-S59．

Routine blood tests and liver function analysis of Eimeria stiedai－infected rabbits

SONG Hong-yan，JING Jin，JIANG Ying-mei，SHAO Yi-xiang
(Laboratory Animal Center of Nantong University，Nantong 226001，China)

Routine blood tests，liver functions and four characteristics of blood coagulation of Eimeria stiedai-infected rabbits were detected and analyzed．Sporulated oocysts were given orally to eight coccidian-free two-month-old New Zealand rabbits，and eight uninfected New Zealand rabbits were set up as the negative control group．After 30 days，blood samples from the rabbit hearts were collected for routine blood tests，liver functions and four characteristics of blood coagulation were analyzed．Blood tests showed that glutamine transferase and serum cholinesterase were significantly different from those in the non-infected controls．Other extremely significant differences were observed in the biochemical indices of liver function，routine blood tests and four blood coagulation characteristics．Liver function ofrabbits infected with E．stiedai for a month was severely impaired．

Eimeria stiedai，New Zealand rabbits，routine blood tests，liver functions，four characteristics of blood coagulation

SHAO Yi-xiang

S865．1

A

:0529-6005(2017)01-0027-03

2015-11-26

国家自然科学基金(31301926);江苏省自然科学基金(BK20130388)

宋鸿雁(1982-)，女，副教授，博士，主要从事实验动物学研究，E-mail:15051277939@163．com

邵义祥，E-mail:shaoyx@ntu．edu．cn