吴亚敏

【摘要】 目的 探析辅助生殖技术致妊娠的早期流产患者绒毛染色体异常情况。方法 400例孕早期流产患者， 其中320例自然妊娠孕早期自然流产患者作为对照组， 80例因辅助生殖技术致妊娠的孕早期自然流产患者作为观察组。对两组患者的绒毛细胞进行分离、染色体分析， 观察两组的对比结果。结果 观察组患者中 <40岁的患者染色体正常例数为41例， ≥40岁的患者染色体正常例数为4例， 共45例， 染色体正常例数为35例；对照组患者中<40岁的患者染色体正常例数为181例， ≥40岁的患者染色体正常例数为11例， 共192例， 染色体正常例数为128例；两组患者在不同年龄段（以40岁为界）染色体异常率对比， 差异具有统计学意义 （P<0.05）。结论 辅助生殖技术致妊娠早期流产与自然流产的发生率无明显差异， 但绒毛细胞染色体异常与育龄妇女的年龄有明显的关系， 年纪≥40岁的患者采用辅助生殖技术妊娠更容易导致妊娠早期流产。

【关键词】 辅助生殖技术；妊娠早期；染色体异常

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.04.042

近年来， 助生殖技术（assisted reproductive technology， ART）廣泛用于治疗不孕问题， 相关研究显示[1]， 发达国家每年有≥3%的辅助生殖技术出生儿， 辅助生殖技术为不孕家庭带来了福音。自然流产是一种人类优胜劣汰的自然选择结果， 发生自然流产的几率为15%， 在全部流产中占75%的比例， 导致自然流产的主要原因是染色体异常（夫妻染色体异常与胚胎染色体异常）。近30年来， 辅助生殖技术得到了高速发展， 但有相关报道指出[2， 3]， 辅助生殖技术致早期妊娠流产率较高， 为此， 本院对400例流产患者进行了绒毛细胞分离和染色体分析， 现做如下报告。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2015年1月～2016年1月本院收治的孕早期流产患者400例， 将其中320例自然妊娠孕早期自然流产患者作为对照组， 80例因辅助生殖技术致妊娠的孕早期自然流产患者作为观察组。观察组患者年龄22～43岁， 平均年龄（33.6±3.3）岁， 孕周7～12周；对照组患者年龄25～44岁， 平均年龄（31.2±5.2）岁， 孕周7～12周。两组患者一般资料比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。在告知两组患者实验过程及目的后， 均表示愿意参加实验并签署知情同意书， 实验获得了医院伦理委员会批准同意。

1. 2 方法 先提取绒毛细胞， 对流产的患者进行子宫清宫术， 备好负压吸引管， 清宫时严格遵守无菌操作规程， 采用负压吸引管利用负压原理， 吸附绒毛组织5～20 mg。将这5～20 mg绒毛组织作为标本， 放入生理盐水中浸泡， 并立即送入中心实验室备检。标本送达后， 立对绒毛组织标本进行分离培养， 采用双抗清洗法清洗标本， 去污物（血块、蜕膜组织）， 保留典型的绒毛组织约10 mg， 将清洗后的标本放入离心管置入离心机进行离心操作， 离心结束后观察管内分层， 去除上层的液体， 在下层滴入生物酶（胶原酶、胰酶）， 将标本放入保温箱， 仔细观察并记录， 待出现绒毛散开现象时， 立即滴入母牛血清， 采用电子显微镜观察绒毛细胞形态。当视野中出现成片状细胞， 将标本放入新鲜的培养液中并滴入生物碱（秋水仙素）， 再次放置在保温箱内， 放置时间为4 h， 然后去掉上层清夜， 将标本置入水浴箱， 2 h后取出， 将标本放入离心机再次离心， 将离心后的标本去上清液制成悬液， 通过莱卡显微镜进行观察， 选择两名医生同时读标本玻片， 每例计算20个分裂象， 分析2个核型（嵌合体加倍计数）。

1. 3 统计学方法 采用SPSS13.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

观察组患者中 <40岁的患者染色体正常例数为41例， ≥40岁的患者染色体正常例数为4例， 共45例， 染色体正常例数为35例；对照组患者中<40岁的患者染色体正常例数为181例， ≥40岁的患者染色体正常例数为11例， 共192例， 染色体正常例数为128例；两组患者在不同年龄段（以40岁为界）染色体异常率对比， 差异具有统计学意义 （P<0.05）。见表1。

3 讨论

辅助生殖技术是治疗不孕不育的一种手段， 有体外受精-胚胎移植（IVF-ET）、卵子体外成熟（IVM）、人工受精（AI） 等形式[4]。根据WTO的相关数据显示[5-9]， 我国的不孕症发病率高达15%， 传统的治疗远远不能满足日益增长的不孕不育患者的治疗需要。

自然流产是妊娠过程中常见的并发症， 而染色体异常则是自然流产的主要原因之一， 包括夫妻染色体异常和胚胎染色体异常[10-12]。夫妇染色体异常常见的有平衡易位和罗伯逊易位， 胚胎染色体异常常见的有三倍体、多倍体及染色体平衡易位、嵌合体等。与自然流产相比， 辅助生殖技术妊娠不增加妊娠早期流产率， 但是与流产孕妇的年龄存在着一定的关系。本研究通过对流产的患者进行子宫清宫术， 清宫时采用负压吸引管利用负压原理， 取出绒毛组织5～20 mg作为实验标本， 将其放入生理盐水中浸泡， 然后对绒毛组织标本进行分离培养， 采用双抗清洗法清洗标本， 去除血块及蜕膜组织， 保留典型的绒毛组织， 进行离心操作， 观察标本现象。发现自然妊娠孕早期自然流产患者的绒毛细胞染色体异常率与辅助生殖技术致妊娠早期自然流产患者的绒毛细胞染色体异常率无明显差异（P>0.05）， 但是不同年龄间差异具有统计学意义（P<0.05）。

相关研究显示[2]， 辅助生殖技术能影响表观遗传（印记基因）的调控， 影响胚胎植入和胎儿生长等， 表观遗传学方面的异常能使胚胎停育， 基因印记缺陷会导致早期妊娠的不稳定易发生流产[1]。控制性招促排卵过程中， 大剂量促性腺激素的使用， 可能是引起配子及胚

胎印记异常， 辅助生殖技术实施时间正处于印迹重建的窗口期， 运用于当中的操作会对配子及胚胎的甲基化状态发生一定的影响。

本文研究结果显示， 观察组患者中 <40岁的患者染色体正常例数为41例， ≥40岁的患者染色体正常例数为4例， 共45例， 染色体正常例数为35例；对照组患者中<40岁的患者染色体正常例数为181例， ≥40岁的患者染色体正常例数为11例， 共192例， 染色体正常例数为128例；两组患者在不同年龄段（以40岁为界）染色体异常率对比， 差异具有统计学意义（P<0.05）。其中观察组和对照组流产孕妇中年龄越大其染色体异常率明显越高， 这是一种母龄效应， 首先高龄本身就是一种妊娠高危因素， 不论是自然妊娠还是辅助生殖技术妊娠， 都增加流产的风险。随着年龄的增长， 机体生理功能也发生一定程度的退化， 女性尤其体现在生殖系统方面， 卵子发生衰老， 衰老的卵子影响染色体间的相互关系和分裂行动， 导致染色体融合。卵巢功能退化， 可能导致雌激素水平下降， 会促使卵泡纺锤体老化， 影响有丝分裂的正常进行。自然妊娠和辅助生殖技术获得妊娠， 胚胎染色体异常都是早期妊娠流产的主要原因[13-16]， 因此， 对发生了自然流产患者进行流产染色体遗传学检查有重要意义。

综上所述， 辅助生殖技术并不增加妊娠早期流产胚胎染色体异常的发生率， 但绒毛细胞染色体异常与育龄妇女的年龄有明显的关系， 年纪≥40岁的患者采用辅助生殖技术妊娠更容易导致妊娠早期流产。

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