许妍妍，董 宇，王 新，彭 飞，孙晓静，余少璟，辰巳英三，栾广忠

(1.西北农林科技大学 食品科学与工程学院，陕西杨凌 712100；2.开封市食品药品检验所，河南开封 475000；3.日本国际农林水产业研究中心，日本筑波 305-8686)

β-伴大豆球蛋白α′-亚基的基因克隆及原核表达

许妍妍1，董 宇2，王 新1，彭 飞1，孙晓静1，余少璟1，辰巳英三3，栾广忠1

(1.西北农林科技大学 食品科学与工程学院，陕西杨凌 712100；2.开封市食品药品检验所，河南开封 475000；3.日本国际农林水产业研究中心，日本筑波 305-8686)

为制备N-连接糖基缺失的重组β-伴大豆球蛋白α′-亚基，以‘鲁96150’大豆种子为原料提取总RNA，经RT-PCR一步法获得‘鲁96150’大豆的全长cDNA，采用自行设计的引物F1/F2扩增得到目的基因α′，与pGEM-T easy载体相连构建重组克隆载体pGEM-α′，经XhoⅠ/EcoRⅠ双酶切得到目的基因与载体pET-28a连接构建重组原核表达载体pET-28a-α′，将经菌落PCR、双酶切及测序鉴定正确的表达载体转入感受态细胞E.coliBL21(DE3)，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白α′-亚基。对重组α′-亚基的诱导表达条件进行筛选，发现在菌液OD600值为0.8、诱导温度30 ℃、IPTG浓度为0.2 mmol/L的诱导条件下诱导9 h后α′-亚基的表达量较高，重组α′-亚基的分子质量大小约为70 ku；工程菌pET-28a-α′-BL21经超声破碎、离心后发现重组α′-亚基部分存在于上清液中，部分形成包涵体蛋白。重组α′-亚基的克隆及表达为β-伴大豆球蛋白结构及功能特性的研究奠定基础。

β-伴大豆球蛋白；亚基；重组蛋白；克隆；基因表达

β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)是大豆蛋白的主要组分之一，由α′-亚基(71 ku)、α-亚基(67 ku)及β-亚基(50 ku)3种亚基通过疏水作用和氢键构成三聚体；这3种亚基的含量对大豆蛋白的功能特性有显著影响。……