何亚鹏，鲍长磊，张 琪，付明哲，许信刚

(西北农林科技大学 动物医学院，陕西杨凌 712100)

小反刍兽疫病毒疫苗株N和M基因的克隆、序列分析及原核表达

何亚鹏，鲍长磊，张 琪，付明哲，许信刚

(西北农林科技大学 动物医学院，陕西杨凌 712100)

根据GenBank已登录的PPRV基因组序列，设计并合成2对特异性引物，以PPRV疫苗株基因组为模板，经RT-PCR扩增获得N和M基因并进行序列分析，再将2个基因插入到原核表达载体pET-28a中，经鉴定正确后转化BL21感受态细胞进行IPTG诱导表达，并进行SDS-PAGE和Western blot检测。成功克隆PPRV疫苗株N和M基因，重组菌经IPTG诱导后表达分子质量为57.7 ku N蛋白(核衣壳蛋白)和38.1 ku的M蛋白(基质蛋白)，2个蛋白均能与小反刍兽疫阳性血清特异性结合，具有良好的反应原性。

小反刍兽疫毒；N基因；M基因；克隆；序列分析；原核表达

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits virus,PPRV)引起的一种急性、热性、接触性传染病，主要感染山羊、绵羊和鹿等小反刍动物，世界动物卫生组织(OIE)将该病列为必须通报的动物传染病，中国将其列为一类动物疫病[1]。PPRV是副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)的成员。PPRV的基因组为不分节段的单股负链RNA，从3′至5′依次是N-P-M-F-H-L6个基因，编码8种相应的蛋白，分别为核衣壳蛋白(N)、磷蛋白(P)、大蛋白(L)、囊膜基质蛋白(M)、纤突糖蛋白(F)、血凝素蛋白(H)及2个非结构蛋白(C和V)[2-3]。N基因全长1 674 bp，包含1个开放性阅读框(ORF)，编码525个氨基酸，其编码的N蛋白在病毒蛋白中含量最高，同时也是核蛋白核心的主要组成元素，与RNA紧密结合，保护核酸，其被认为在病毒的复制和转录中起主要作用[4]。……