秦雯，郑敏，华敏，万润，文明*(.贵阳护理职业学院卫生管理系，贵阳 55008；. 贵州大学动物疫病研究所，贵阳 55005)

贵州省部分地区H7亚型禽流感监测与分析

秦雯1，郑敏2，华敏2，万润2，文明2*
(1.贵阳护理职业学院卫生管理系，贵阳 550081；2. 贵州大学动物疫病研究所，贵阳 550025)

为了解贵州省H7亚型禽流感感染情况，采用HI试验对全省9个地区家禽血清样本进行血清抗体检测，PT-PCR方法对家禽咽-肛拭子、养禽场环境样本和野鸟粪便进行病原核酸检测。结果显示：在1570份家禽血清样本中，H7亚型禽流感血清抗体阳性率为0.45%(7/1570)；在350份家禽咽-肛拭子和310份养殖场环境样本中，均未检测出H7亚型禽流感病毒核酸；在160份野鸟粪便中，有1份为H7亚型禽流感病毒核酸阳性，阳性率为0.63%(1/160)。试验提示，在贵州省养禽场中不存在H7亚型禽流感感染，但迁徙野禽中可能存在H7亚型禽流感隐性感染，应当引起重视。

H7亚型禽流感；监测；贵州省

禽流感(avian influenza，AI)是由A型流感病毒引起的一种严重危害禽类健康的传染性疾病。本病于1878年在意大利首次发现，现几乎已遍布世界各地[1]。禽流感分非致病性、低致病性和高致病性三类，前两类属于温和型禽流感，一般不引起家禽发病或发病症状较轻，而高致病性禽流感主要是由H5和H7亚型禽流感病毒引起，一旦暴发，常导致鸡群全军覆灭而造成严重的经济损失，尤其在火鸡和鸡中。

H7亚型禽流感属于高致病性禽流感，近年来呈现扩大蔓延趋势，疫情遍及全球各地，导致家禽死亡已达7000万以上，现已引起全球养殖业和人类的广泛关注[2]。2013年我国首次发现人感染新型H7N9亚型禽流感[3]。由于H7亚型禽流感病毒感染后，家禽常呈现无症状态势[4-6]，因此人们对H7亚型禽流感不够重视，这增加了H7亚型禽流感隐性感染的可能性和机会。贵州省是经济欠发达地区，也是我国受到禽流感侵袭次数和发病数最多的地区之一[7]。为此，笔者于2015年采集贵州省9个地区(州、市)45个县(区、市)的养禽场、活禽交易市场、活禽屠宰点和自然保护区的样本，采用HI试验和RT-PCR方法进行了检测分析[8-9]，以期为贵州省H7亚型禽流感的防控提供基础数据。

1 材料及方法

1.1 样本来源 采集自贵州省9个地(州、市)45个县(区、市)定点监测点，包括规模养殖场、散养户、活禽交易市场、活禽屠宰点和自然保护区，其中家禽血清样本1570份、家禽咽-肛拭子350份、环境土壤样本310份和野鸟粪便160份。

1.2 检测试剂 H7亚型禽流感血凝诊断抗原及阳性血清、H7亚型禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒等，购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所；RNA提取试剂盒，购自宝生物工程(大连)有限公司；1%鸡红细胞悬液，本实验室自制。1.3 H7亚型禽流感血清抗体检测 参照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003)，采用血凝抑制试验(HI)进行检测，然后对检测结果进行详细记录。

1.4 H7亚型禽流感病毒核酸检测 取家禽咽-肛拭子、养禽场环境样本和野鸟粪便样本，按常规方法处理后，用RNA提取试剂盒提取总RNA样本，超微量核酸蛋白仪进行RNA的质量检测，然后按照H7亚型禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒说明书步骤进行检测，观察和记录结果。

2 结 果

2.1 家禽血清样本中H7亚型禽流感抗体检测结果 采用HI试验对采集的1570份家禽血清样本进行H7亚型禽流感抗体检测，结果如表1所示：在贵州省9个地(州、市)监测点中，有6个地(州、市)均可检出H7亚型禽流感抗体阳性，总体阳性率为0.45%(7/1570)。

表1 贵州省H7亚型禽流感抗体检测结果

2.2 家禽咽-肛拭子中H7亚型禽流感病毒核酸检测结果 提取家禽咽-肛拭子中总RNA样本，所有样本经检测其OD260/280均在1.8～2.0范围内，说明RNA纯度较高。采用荧光定量RT-PCR进行禽流感病毒核酸检测，结果在350份家禽咽-肛拭子中均未检出H7亚型禽流感病毒核酸。

2.3 环境样本中H7亚型禽流感病毒核酸检测结果 提取环境样本中总RNA样本，所有样本经检测其OD260/280均在1.8～2.0范围内，说明提取的RNA纯度较高。采用荧光定量RT-PCR进行禽流感病毒核酸检测，结果在310份养禽场环境样本中均未检出H7亚型禽流感病毒核酸。

2.4 野鸟粪便中H7亚型禽流感病毒核酸检测结果 提取野鸟粪便样本中总RNA样本，经检测所有提取样本的OD260/280均在1.8～2.0范围内，说明RNA纯度较高。采用荧光定量RT-PCR进行禽流感病毒核酸检测，结果如表2所示：在160份野鸟粪便样本中有1份检出H7亚型禽流感病毒核酸，检出率为0.63%(1/160)。

表2 野鸟粪便样本H7亚型禽流感抗体检测结果

3 讨 论

H7亚型禽流感大多表现为高致病性，但近年来发现在禽类机体内存在一些低致病性的H7亚型禽流感病毒毒株[10]。这些低致病性毒株能在家禽肠道上皮细胞进行有效的复制，并随其粪便排泄污染周边环境，导致其他禽类接触受污染的环境时可能会感染，使得这些低致病性毒株在禽类中处于隐性传播势态。但人类感染这类低致病性毒株后，则可表现出严重的临床症状，有的甚至死亡，给人类健康造成严重的威胁[11-12]。因此，加强禽类H7亚型禽流感的监测是十分有必要的。

血清抗体与病原核酸检测是开展禽类H7亚型禽流感监测的重要手段。本次血清抗体检测发现，在贵州省9个地(州、市)1570份家禽血液样本中有7份检出H7型禽流感抗体阳性，抗体阳性率为0.45%(7/1570)，且在6个地(州、市)家禽血液样本中都能检出，鉴于此，本研究组对这7份阳性样本进行了病原核酸检测，结果均为阴性。出现抗体阳性的原因可能是：(1)个别家禽存在既往隐性感染的情况；(2)在贵州省养禽场均强制免疫注射H5型禽流感疫苗，这些H5亚型禽流感疫苗中可能存在极少部分与H7型禽流感病毒共同的抗原；(3)在个别鸡血清样本中存在某些非特异性凝集因子。但在养禽场家禽咽-肛拭子和环境样本中均未检出H7亚型禽流感病毒核酸，这说明贵州省家禽养殖场中不存在H7亚型禽流感病毒感染。

禽流感的发生与流行跟野禽的迁徙活动存在密切的关系[13-15]。研究表明，野禽迁徙途经沿线地区的家禽禽流感感染率要显著高于其他地区，如位于密西西比野禽迁徙路线的美国明尼苏达州，其家禽禽流感病毒感染率明显高于没有野禽迁徙经过的其他州[16-17]。本次采集贵州省各个地区野鸟粪便进行禽流感病毒核酸检测发现，处于野禽迁徙路线的毕节地区(即威宁草海)的野鸟粪便样本检出1份H7亚型禽流感病毒核酸阳性(检出率为1.67%)，说明这些迁徙野鸟可能存在H7亚型禽流感病毒隐性感染。但随后调查组先后2次到该地区采集野鸟粪便样本计200份进行检测，均未检出H7亚型禽流感病毒核酸，说明这些迁徙的野鸟并未普遍携带或隐性感染H7亚型禽流感病毒。但由于贵州省特别是威宁草海是野鸟迁徙的聚居地[18]，发生H7亚型禽流感疫情的可能性较大，因此应加强该地区禽流感疫情的监测，以防止禽流感的发生与流行。

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(编辑：李文平)

Detection and Analysis of H7 Subtype Avian Influenza in 2015 in Guizhou Province

QIN Wen1, ZHENG Min2, HUA Min2, WAN Run2, WEN Ming2
(1.DepartmentofHealthManagement,GuiyangNursingVocationalCollege,Guiyang550081,China; 2.InstituteofAnimalDiseasesResearch,GuizhouUniversity,Guiyang550025,China)

To master the infection situation of H7 subtype avian influenza (AI-H7) in Guizhou province, the serum samples of poultry were collected to detect the AI-H7 antibodies by HI test, and the samples of swallow-anal swabs and environment and wild bird faeces were gathered to determine the pathogenic nucleic acid of AI-H7 by RT-PCR method. The results showed that the positive rate of AI-H7 antibodies was 0.45% in 1570 of poultry serum samples. And the pathogenic nucleic acid of AI-H7 were not detected in 350 of swallow-anal swabs and 310 of farm environment samples, but 1 sample in 160 of wild bird faeces which the positive rate was 0.63%. These results suggested that there were no infection of AI-H7 in poultry farm, but maybe latent infection in wild birds and should be paid attention.

H7 subtype avian influenza；detection；Guizhou province

2016-11-09

A

1002-1280 (2017) 02-0013-03

S858.3

贵州省百层次创新型人才项目(黔科合人才[2016]4009号)；贵州省科技创新人才团队建设项目(黔科合人才团队[2015]4016号)

秦雯，硕士，讲师，从事卫生检疫检验教学与科研工作。

文明。E-mail：as.mwen@gzu.edu.cn