李 雯, 陶 妍

(上海海洋大学食品学院/上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心，上海 201306)

鲤鱼g型溶菌酶基因的cDNA克隆及其在毕赤酵母中的表达

李 雯, 陶 妍

(上海海洋大学食品学院/上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心，上海 201306)

从鲤鱼鳃组织中分离克隆到一种新的g型溶菌酶同工型基因(CLYG).该基因的全长cDNA为558 bp，除去终止密码子,编码185个氨基酸，推断的氨基酸序列没有信号肽，含3个催化位点(谷氨酸73、脯氨酸86和天冬氨酸97)，具有鱼类g型溶菌酶的基本特征.通过PCR方法在CLYG基因的5′和3′端分别引入XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点.扩增到的目的片段与表达载体pPICZαA连接构建重组表达载体pPICZαA-CLYG后，电转至毕赤酵母X-33，筛选得到的阳性转化子在1.0%甲醇、29 ℃、pH 6.0的条件下诱导表达72 h，获得重组体CLYG.SDS-PAGE和蛋白质印迹分析显示，在毕赤酵母中成功表达了重组体CLYG.

鲤鱼; g型溶菌酶; 毕赤酵母; 重组表达

溶菌酶(EC 3.2.1.17)是一类能水解肽聚糖N-乙酰胞壁酸(NAM)与N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)之间的β-1,4-糖苷键的酶的总称，又称为胞壁质酶，1921年，由苏格兰生物学家Fleming发现[1].溶菌酶是机体重要的先天性免疫物质，参与水解细菌的细胞壁，具有抑制外源微生物生长的作用；同时，它也是一种理想的蛋白研究模型，在蛋白质化学、酶学、结晶学、光谱学、免疫学和分子生物学等研究领域都起到重要作用[2].根据生物来源和作用机制，可以将溶菌酶分为动物源溶菌酶、植物源溶菌酶、微生物源溶菌酶和噬菌体T4溶菌酶.其中，动物源溶菌酶又可以分为c型、g型和i型.3种……