张磊，张彦平，张雯，王金华，黄伦，徐阳

(西安交通大学第二附属医院检验科，西安 710004)

·产品应用研究·

CellaVision DM96血细胞数字图像分析仪计数网织红细胞的性能评价

张磊，张彦平，张雯，王金华，黄伦，徐阳

(西安交通大学第二附属医院检验科，西安 710004)

目的 评价CellaVision DM96血细胞数字图像分析仪(简称“DM96”)计数网织红细胞的性能。方法 随机选取116例EDTA-K2抗凝全血标本，用DM96、手工法、Sysmex XE-2100(简称“XE-2100”)和Beckman Coulter LH750(简称“LH750”)计数网织红细胞并比较。结果 用DM96红细胞分析模块计数网织红细胞，与XE2100、LH750、手工法差异无统计学意义(P<0.05)。结论 用DM96红细胞分析模块计数网织红细胞性能良好。

网织红细胞；Cella Vision DM96；红细胞分析模块

基于人工神经网络(artificial neural network)智能技术的CellaVision DM96血细胞数字图像分析仪(以下简称“DM96”)运用影像法分析外周血细胞，针对白细胞(WBC)检测表现良好。DM96对中性粒细胞(Ne)、淋巴细胞(Ly)、单核细胞(Mo)、嗜酸性粒细胞(Eo)、嗜碱性粒细胞(Ba)和原始细胞(Blast)识别能力较高，但对早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞的鉴别缺乏准确性[1-2]。在红细胞识别方面，DM96基础版本可鉴别部分异常RBC形态，升级版本红细胞分析模块依据RBC大小、着色程度、形状、内含物及均一度等可识别更多的异常RBC形态，且给出定量结果[3]。与人工检测费时相比，该功能准确高效的性能已在各种异常RBC形态检测中得到验证[4]。本研究利用DM96升级版本红细胞分析模块自动识别RBC内含物的原理定量检测网织红细胞，并与手工法、Sysmex XE-2100(以下简称“XE-2100”)和Beckman Coulter LH750(以下简称“LH750”)计数网织红细胞比较。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集西安交通大学第二附属医院2016年1至4月门诊和住院患者EDTA-K2抗凝全血标本共116例，室温(18～22 ℃)放置，2 h内完成检测。

1.2 仪器与试剂 XE-2100全自动血液分析仪、SP-1000i自动推片染色仪及其原装配套试剂(日本Sysmex公司)；LH750全自动血液分析仪及其原装配套试剂(美国Beckman Coulter公司)；DM96 自动化血细胞数字图像分析仪(瑞典Cellavision AB 公司)；煌焦油蓝染液、瑞氏染液(珠海BASO公司)；微量移液器等。

1.3 实验方法 仪器法：用XE-2100和LH750严格按血液分析仪的操作规程检测116例标本。手工法：用微量移液器吸取EDTA-K2抗凝全血标本100 μL于反应杯中，与煌焦油蓝按1∶1混匀染色，室温下放置30 min。将反应杯中标本混匀放入SP-1000i自动推片染色机中，选择手动模式中微量模式制作血涂片，用瑞氏染液复染(染色过程：甲醇固定2 min，瑞氏染液染色1 min，加缓冲液2 min，冲洗1 min，干燥1 min)。由两位中级职称以上的从事血液形态学检验的技师在显微镜下计数1 000个RBC中网织红细胞的比例，取平均值为手工法网织红细胞结果。

DM96自动计数法：将制作好的涂片放入DM96读片盒中，按标准操作规程将读片盒放入DM96中扫描、定位及细胞分类计数。DM96红细胞形态分析模块可预判RBC内含物(inclusions)的形态分类结果，即：Howell-Jolly(豪焦小体)、Pappenheirner(帕彭汉姆小体)、basophilic stippling(嗜碱性点彩红细胞)、paracites(疟原虫)。将这4种预判形态RBC个数与总数N(number of RBCs used for pre-characterization)比值作为预判网织红细胞结果。点击RBC形态分析(individual cells)界面人工复检含有煌焦油蓝着色的RBC，将判定没有着色的RBC补充计数，归类校准为最终DM96的网织红细胞。

1.4 统计学分析 用SPSS 22.0 统计软件进行。多组比较用方差分析，用Pearson相关分析相关性；以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

DM96、XE-2100、LH750和手工法网织红细胞计数结果(%)分别为1.98±0.29、2.01±0.21、1.89±0.19、1.85±0.74，差异无统计学意义(P>0.05)。DM96与XE2100、LH750、手工法计数网织红细胞结果的相关系数分别为0.854、0.584、0.816(P均<0.05)。

3 讨论

近年来全自动流式细胞核酸染色法血液分化仪已广泛应用于临床。XE-2100网织红细胞流式细胞核酸染色法，通过检测前向散射光和侧向荧光信息，获得网织红细胞的数量和成熟参数；LH750全自动血液分析仪采用VCS技术原理检测网织红细胞；网织红细胞成熟参数各厂家的参考值不同，推测由于染色试剂与检测原理不同对网织红细胞灵敏度不同[5]。

仪器法检测网织红细胞具有一定的局限。Brown等[6]发现，Howell-Jolly小体、疟原虫、大血小板、红细胞聚集、冷凝集素或药物均直接干扰仪器法网织红细胞参数的检测；在网织红细胞比例增高(约 20.0%)时，流式细胞仪法检测结果与镜检法相差甚远；镜检法直接观察细胞形态可排除此类干扰和偏差，故仪器计数网织红细胞仍需推片复检。

传统手工显微镜法计数网织红细胞影响因素较多。本研究采用SP-1000i全自动推片染色仪可排除因手工推片而造成的血涂片薄厚不均、细胞分布不均匀、染色时间长等因素。煌焦油蓝染色外周血涂片，在DM96上自动化识别网织红细胞可排除人为影响因素。

Mahe等[7]用CellaVision DM96红细胞形态分析模块计数网织红细胞，与流式细胞核酸染色法的检测结果无差异；本研究结果与其报道一致。目前国内尚未发现CellaVision DM96对网织红细胞计数做过相关报告，亦未有网织红细胞复染DM96阅片的相关报告。本研究用SP-1000i自动推片染色仪和网织红细胞复染进行半自动化的血涂片制作，用CellaVision DM96自动化红细胞形态分析模块计数网织红细胞，其图片可永久性保存并具备良好的溯源性。另外，DM96红细胞分析模块所检测分析的红细胞数量>2 000，与人工抽样检测相比更具准确性。

[1]Lee LH, Mansoor A, Wood B,etal. Performance of CellaVision DM96 in leukocyte classification[J]. J Path Informatics, 2013, 4:14.

[2]Egelé A, Stouten K, Van der Heul-Nieuwenhuijsen L,etal. Classification of several morphological red blood cell abnormalities by DM96 digital imaging[J]. Int J Lab Hematol, 2016, 38(5):e98-e101.

[3]Criel M, Godefroid M, Deckers B,etal. Evaluation of the Red Blood Cell Advanced Software Application on the CellaVision DM96[J]. International Int J Lab Hematol, 2016, 38(4):366-374.

[4]BreReton M, Mccafferty R, Marsden K,etal. Recommendation for standardization of haematology reporting units used in the extended blood count[J]. Int J Lab Hematol, 2016, 38(5):472-482.

[5]时永辉, 王锋, 洪骏,等. LH750与XE2100血液分析仪检测未成熟网织红细胞指数的比较[J]. 临床检验杂志, 2012, 30(6):424-425.

[6]Brown M, Wittwer C. Flow cytometry: principles and clinical applications in hematology[J]. Clin Chem, 2000, 46(8 Pt 2):1221-1219.

[7]Mahe ER, Higa D, Naugler C,etal. Accuracy of the CellaVision DM96 platform for Reticulocyte counting[J]. J Path Informatics, 2014, 5(1):17.

(本文编辑：王海燕)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.02.21

张磊,1983年生，男，主管技师，硕士，主要从事临床检验工作，E-mail:616867536@qq.com。

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