肖红侠，张喜霞，邵世峰，张立，张丽霞(天津医科大学海河临床学院，天津 300050)

·临床实验研究·

黄芩苷对结核分枝杆菌抑菌作用的研究*

肖红侠，张喜霞，邵世峰，张立，张丽霞
(天津医科大学海河临床学院，天津 300050)

目的 探索黄芩苷对结核分枝杆菌的体外抑制作用。方法 采用改良罗氏药敏绝对浓度法对107株结核分枝杆菌进行黄芩苷的体外抑菌试验。结果 107株结核分枝杆菌的体外抑菌试验结果表明，黄芩苷对结核分枝杆菌有明确的抑制作用，最低抑菌浓度(MIC)值为0.75～12 mg/mL之间，MIC为12 mg/mL的菌株占8.41%，6 mg/mL的菌株占46.73%，3 mg/mL的菌株占37.38%，1.5 mg/mL的菌株占6.54%，0.75 mg/mL的菌株占0.93%，MIC50和MIC90均为6 mg/mL。结论 6 mg/mL黄芩苷具有较强的体外抗结核分枝杆菌作用。

黄芩苷； 结核分枝杆菌；最小抑菌浓度

黄芩具有抵抗病毒、细菌和真菌等微生物感染、保肝利胆等诸多疗效[1]。黄芩苷是从黄芩中提取出来的一种黄酮类化合物，是黄芩发挥药效的主要成分之一。 据文献报道，黄芩苷对临床上多种常见的病原菌具有一定的抑制作用,且呈剂量依赖性[2]。在20世纪60年代就有研究证实以黄芩为主要配方的芩部丹对于耐药开放性及难治性肺结核有明显疗效[3]。我们试图通过体外实验来验证黄芩苷对结核分枝杆菌的抵抗作用。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 结核分枝杆菌试验菌株：收集天津市海河医院结核化验室2012年5月至2014年3月间临床分离结核分枝杆菌107株，包括经罗氏培养绝对浓度法药敏试验检测，利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素等4种一线抗结核药均敏感的菌株53株，利福平(rifampicin, RFP)低耐菌株6株，异烟肼(isoniazid, INH)低耐菌株9株，乙胺丁醇(ethambutol，EMB)低耐菌株17株，多耐药及耐多药菌株22株。以上结核分枝杆菌药敏试验结果的判读均根据《结核病实验室检验规程》[3]中对结核分枝杆菌罗氏绝对浓度法药敏试验的方法学规程。结核分枝杆菌标准菌株H37RV(编号93009)购自中国药品生物制品检定所。

1.2 黄芩苷药敏培养基制作 将黄芩苷(C21H18O11，纯度90.5%，诸城市浩天药业公司)药粉用二甲基亚砜溶解后，用蒸馏水配制成96 mg/mL浓度的黄芩苷原液。分装罗氏培养基基础液后加入不同体积黄芩苷原液，配制终浓度分别为48、24、12、6、3、1.5、0.75、0.375、0 mg/mL共9个浓度的黄芩苷药敏培养基，分装为每支8 mL的单支培养基。使用培养基制备专用D-720型蒸汽凝固器(中国原子能研究所)85 ℃ 50 min凝固，冷却后抽取部分(配制培养基总数的10%)培养基置于37 ℃恒温箱48 h进行无菌试验，测试合格后的培养基放入密封袋置4 ℃冷藏备用。

1.3 最低抑菌浓度(MIC)测定 挑取罗氏初分离培养基上37 ℃恒温箱培养3周左右的菌落，放入灭菌塑料瓶中加灭菌小玻璃珠震荡研磨，加蒸馏水配制成1 mg/mL的菌悬液，吸取100 μL加蒸馏水配制成0.01 mg/mL的菌悬液，用加样器吸取100 μL接种于药敏培养基上，使之均匀铺满整个培养基斜面。每株菌株分别接种至本实验所选9个不同浓度的黄芩苷药敏培养基，每株菌每个浓度培养基平行接种2支，同时接种两支空白对照管，空白对照管为不含任何药物的结核分枝杆菌罗氏初分离培养基。接种后置于37 ℃恒温箱培养4周，每周观察2次，待对照管斜面的3/4长满菌落(约4周)后，拿出判读结果。空白对照管菌落长满培养基斜面的3/4认为结果有效，若空白对照管判读为阴性，则需要重新实验。以含药培养基上无菌落生长的最低含药浓度为此株结核分枝杆菌的最终MIC值。

2 结果

108株菌株培养4周后，空白对照管菌落生长情况均符合实验要求，所有接种培养基均未出现污染、干结、破损等情况。黄芩苷对结核分枝杆菌标准菌株H37RV的MIC为3 mg/mL。107株结核分枝杆菌实验菌株黄芩苷 MIC值在0.75～12 mg/mL之间，MIC为12 mg/mL的菌株占8.41%，6 mg/mL的菌株占46.73%，3 mg/mL的菌株占37.38%，1.5 mg/mL的菌株占6.54%，0.75 mg/mL的菌株占0.93%。根据实验结果判定黄芩苷对结核分枝杆菌生长有较明显的抑制作用，MIC50和MIC90均为6 mg/mL。

3 讨论

张喜平等[2]报道黄芩苷对临床常见病原菌(不包括结核分枝杆菌)的MIC范围为0.1～50 mg/mL。Ge等[4]研究显示，0.5 μg/mL黄芩苷对流感病毒A/FM1/1/47(H1N1)有弱的抑制作用，1 μg/mL和2 μg/mL时则明显抑制流感病毒复制，呈剂量依赖性。Dou等[5]实验表明，1.6 μg/mL黄芩苷可明显抑制副流感病毒。Wang等[6]报道，100、50、10 mg/L的黄芩苷均可抑制白色念珠菌芽管形成及对口腔上皮及阴道表皮的黏附。本实验中得到的黄芩苷体外抑制结核分枝杆菌的MIC结果与文献报道的对临床常见病原菌MIC结果相符，较部分病原微生物如流感、副流感病毒及白色念珠菌稍高。本实验选取对现有抗结核药物不同敏感度的菌株进行了该中药的体外抑菌试验，结果显示黄芩苷对不同耐药程度的分离株均具有较好的抑菌作用，表明黄芩苷在抗结核分枝杆菌中具有较好的应用前景。据中国药典所记述， 将干黄芩片3～9 g水煎成200～400 mL，一天内分次频服，用于热病高热烦渴，或肺热咳嗽，或热盛迫血外溢以及热毒疮疡等。

黄芩苷不但有较强的抑菌作用，而且具备肝脏保护作用[7]，倘若将其与抗结核西药联合用于治疗结核病，相信将会有很大希望取得一个显著的肺结核治疗效果。本实验将会在后期进行黄芩苷与抗结核药体外联合抑菌试验，为中西医结合治疗结核病开拓思路，并为进一步的临床推广打下基础，提高黄芩苷用于治疗结核病的可行性。

[1]Li C, Lin G, Zuo Z. Pharmacological effects and pharmacokinetics properties ofRadixScutellariaeand its bioactive flavones[J]. Biopharm Drug Dispos, 2011, 32(8):427-445.

[2]张喜平,周田美,董晓勤,等. 黄芩苷注射液体外抑菌作用实验研究[J]. 医学研究杂志, 2006, 35(8):39-41.

[3]赵雁林,逄宇.结核病实验室检验规程[M].北京：人民卫生出版社，2005.

[4]Xu G, Dou J, Zhang L,etal. Inhibitory effects of baicalein on the influenza virus in vivo is determined by baicalin in the serum[J]. Biol Pharm Bull, 2010, 33(2): 238-243.

[5]Dou J, Chen L, Xu G,etal. Effects of baicalein on Sendai virus in vivo are linked to serum baicalin and its inhibition of hemagglutinin-neuraminidase[J]. Arch Virol, 2011, 156(5):793-801.

[6]Wang C, Feng X, Zhang X,etal. Inhibitory effect of baicalin on germ tube formation and adhesion ofCandidaalbicans[J]. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 2010, 35(23): 3216-3218.

[7]薛洪源,侯艳宁,刘会臣,等.黄芩苷对异烟肼和利福平肝损害小鼠的保护作用[J].解放军药学学报,2003,19(6):414-417.

(本文编辑：刘群)

天津市卫生局科技攻关课题(10KG217)。

肖红侠，1980年生，女，主管技师，大学本科，从事生化检验工作。

10.13602/j.cnki.jcls.2017.04.14

R446.5

A

2017-02-22)