田娅王素萍石遵铭陈晶罗文辉

（1.湖北省大冶市农产品质量安全管理办公室 435100；2.湖北省大冶市农业执法大队 435100；

3.湖北省大治市陈贵镇农业技术服务中心 435124；4.湖北省大冶市微生物实验站 435100；5.湖北省大冶市植保站 435100）

叶菜类农药残留快速检测方法

田娅1王素萍2石遵铭3陈晶4罗文辉5

（1.湖北省大冶市农产品质量安全管理办公室 435100；2.湖北省大冶市农业执法大队 435100；

3.湖北省大治市陈贵镇农业技术服务中心 435124；4.湖北省大冶市微生物实验站 435100；5.湖北省大冶市植保站 435100）

利用有机磷和氨基甲酸酯农药对乙酰胆碱酯酶的活性的抑制作用，使这种酶在含有有机磷和氨基甲酸酯农药残留的蔬菜样品中不能被水解，从而无显色反应原理，采用吸光度对比法计算抑制率，判断叶菜类蔬菜中是否存在有机磷和氨基甲酸酯类农药的残留，方法简便、快捷、经济，是保障农产品质量安全的重要手段。

叶菜；有机磷；氨基甲酸酯；农药残留；快速检测

叶菜类富含维生素、无机盐、粗纤维等多种营养成份，是人民日常生活中不可缺少的蔬菜，因生长嫩绿，易致菜青虫、小菜蛾、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾等多种害虫为害，农民喷施农药防治不可避免。随着人民生活水平的不断提高，人们对食品安全越来越关注。为保证叶菜类的质量安全，加强农药残留的检测工作势在必行。由于叶菜类产量高，品种多，种植点多面广，样品数量很大。快速检测以其方法简便、快捷、经济、适用的特点，特别适合对叶菜中有机磷和氨基甲酸酯农药残留检测，已成为保障叶菜产品质量安全的重要手段。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂材料及规格

缓冲试剂粉7.5g；乙酰胆碱酯酶粉0.1mg；底物粉125mg；显色剂粉120mg。

1.1.2 仪器

农残快速测定仪，波长412nm；冰箱；恒温箱；振荡器。

1.1.3 检测工具

电子天平、烧杯、试管、剪刀、吸管、刻度滴管、移液器、比色皿、计时器。

1.2 方法

1.2.1 抽样方法

在蔬菜成熟上市前，根据地形情况确定取样方法。采用单对角线、双对角线、五点式、棋盘式和蛇形式方法抽样。生产基地种植面积小于10hm2，每1hm2～3hm2设一个抽样单元；种植面积大于10 hm2，每3hm2～5hm2设一个抽样单元。设施地每个大棚为一个抽样单元，每个抽样单元内抽样点不少于5个，每个抽样点面积1m2左右，蔬菜单个个体大于0.5kg时，抽样样本不少于10个，单个个体大于1kg时，抽取样本不少于5个。批发市场散装样视堆高从上、中、下分层抽样，每层从中间和四角五点取样。堆垛商品取样时，在堆垛两侧的不同部位上、中、下和四角抽取相应数量的样本。

1.2.2 试剂配制方法

a）缓冲溶液

取缓冲试剂粉7.5g，加入500mL蒸馏水或纯净水，溶解搅拌均匀，即得pH=8.0缓冲溶液。

b）酶液

向乙酰胆碱酯酶粉0.1mg瓶中加入3mL缓冲溶液，溶解、混匀即可。4℃下保存，配好的酶液在4℃下可使用7d。切勿冷冻至结冰。

c）底物

向底物粉125mg瓶中加入15mL蒸溜水或纯净水，溶解、混匀即可。4℃下保存，配好的底物在4℃下可使用3d。冷冻保存可使用15d。

d）显色剂

向显色剂粉120mg瓶中加入15mL缓冲溶液，溶解、混匀即可。

a）样品提取

擦掉样品表面泥土，剪成1cm左右见方的碎片；取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲溶液，振荡2min；倒出样品溶液，静置3min，备用。

b）对照测试（空白溶液测试）

在试管中加入2.5mL缓冲液，再加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀，置于37℃恒温箱中放置15min；取出后加入0.1mL底物摇匀，立即倒入比色皿中并放入仪器比色池中进行对照测试，测试时间以3min为准。

c）样品测试

用定量移液器吸取2.5mL样品溶液于试管中，依次加入0.1mL酶液，0.1mL显色剂，摇匀后置于37℃恒温箱中放置15min；取出后加入0.1mL底物摇匀，立即倒入比色皿中并放入仪器比色池中进行样品测试，测试时间以3min为准。

d）计算方法

此外，黑水虻幼虫体内还发现了大量其它的抗菌物质，例如月桂酸、蛋白酶、P450解毒酶、水解酶等，经免疫反应产生的BF64抗菌蛋白和BD2抗菌蛋白，具有特别强的抗菌能力，是青霉素的几百倍。黑水虻幼虫体内丰富的抗菌物质，使其在医药领域具有广阔的应用前景，可以开发制备更多具有抗菌、保健的医药产品。

式中：

△A空白：对照溶液反应3min吸光度变化值；

△A样品：样品溶液反应3min吸光度变化值。

2 结果与分析

2.1 检测原理及内容

乙酰胆碱酯酶水解后，水解产物可与显色剂反应产生颜色，有机磷和氨基甲酸酯类农药可以抑制乙酰胆碱酯酶的活性，使这种酶不能被水解，从而无显色反应。根据这个原理，利用胆碱酯酶的催化反应的抑制法，通过颜色变化直观检测方法，快速检测叶类蔬菜中有机磷农药残留或氨基甲酸酯类农药残留。

2.2 检测结果

根据样品和对照中的吸光度变化值的检测，按抑制率计算方法，检测结果抑制率大于50%时检测结果为阳性，注意对于阳性样品要有2次以上重复检测。

2.3 判定依据和标准

样品检测为阳性，依据GB2763-2014进行判定，为有机磷或氨基甲酸酯类农药残留超标。监测项目全部合格者，判定为“该产品所检项目符合GB2763-2014的要求”。

3 问题与探讨

3.1 操作与试剂保存

a）溶解、配制试剂时要小心操作，注意不能使瓶盖上沾染的部分试剂粉末损失，以免影响检测精确程度。

b）显色时间3min时，对照测试（空白溶液测试）吸光度变化应在0.3以上。

c）试剂溶解前冷冻保存的保质期为1年；冷藏保存时间不建议过长。

d）酶粉溶解后要尽快用完，可短期冷藏保存；如1星期内不能用完，应冷冻保存，但反复冻融不可超过3次，冷冻保存不超过30d。

e）底物和显色剂溶解后需冷藏保存，保持期1个月；可冷冻长期保存。

3.2 特种蔬菜检测方法

葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，因为含有色素、纤维素、次生物质等较多的蔬菜样品在农药残留检测过程中会导致假阳性比较高，一般建议的处理如下方式：

a）对一些含叶绿素较高的蔬菜（如：香菜、韭菜）等可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰；

b）含色素明显的蔬菜样品（如：萝卜）在样品处理中，加1g～2g活性碳振荡过滤2min，然后提取滤液中的上清液检测；

c）含纤维素多的蔬菜样品（如：茭白）等在样品处理过程中，用密性滤纸过滤，然后提取滤液中的上清液检测。

[1]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会GB/T 5009.199-2003.

[2]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会GB 2763-2014.

[3]蒋新.果蔬中有机磷农药残留快速检测方法研究进展[J].农业灾害研究,2013,3（07）:55-57.

[4]刘亚平,张金艳,孙东立.酶抑制率法在4种蔬菜农药残留快速检测中的应用[J].安徽农业科技,2014,42（2）：427-428,470.

S131+2

B

1005-6114（2017）01-010-003

2016-07-25

田娅（1987-），女，助理农艺师，从事农产品农药残留检测工作。