栗亚美， 陈阿娜， 杨艳坤， 白仲虎

(1. 江南大学 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室， 无锡 214122; 2. 江南大学 工业生物技术教育部

酸性普鲁兰芽孢杆菌普鲁兰酶在大肠杆菌中分泌表达研究

栗亚美1,2,3， 陈阿娜1,2,3， 杨艳坤1,2,3， 白仲虎1,2,3

(1. 江南大学 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室， 无锡 214122; 2. 江南大学 工业生物技术教育部

重点实验室， 无锡 214122; 3. 江南大学 糖化学与生物技术教育部重点实验室， 无锡 214122)

来自于酸性普鲁兰芽孢杆菌的普鲁兰酶，由于分子量较大，在大肠杆菌中难以实现高效分泌表达。为研究其在E.coli中高效分泌表达策略，构建了带信号肽的pET-28a(+)-pelB-pul13A质粒，通过发酵过程控制及向发酵培养基中添加促分泌物质，系统地优化了分泌表达策略。通过分子改造，带信号肽的表达系统实现了低水平的分泌性表达；进一步通过优化培养基、诱导温度、IPTG浓度、诱导时机及11种培养基添加物，促进普鲁兰酶最大限度的分泌到周质空间。实验结果显示，连上pelB信号肽的pull3A在TB/SB培养基中，通过优化的诱导条件(IPTG浓度0.1 mmol/L，诱导温度20℃，诱导时机为接种后5 h)，在诱导20 h时加入0.03%SDS，周质空间酶活达到最大值102.5 U/mL。在此基础上，探究了化学添加剂对大肠杆菌细胞膜及膜通透性的影响，并应用优化后的系统实现了乙酰胆碱酯酶和单域抗体的分泌表达。为大分子蛋白在大肠杆菌中分泌表达提供参考。

普鲁兰酶；分泌表达；信号肽；发酵优化；培养基添加物；十二烷基磺酸钠

普鲁兰酶是一种淀粉脱支酶，能专一性的切开α-1,6糖苷键，是淀粉加工业和制糖工业必不可少的酶制剂[1-3]。……