沈慧敏, 李 超, 高 利, 刘太国, 刘 博, 陈万权

(中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193)

原生质体法介导真菌遗传转化的研究进展

沈慧敏, 李 超, 高 利*, 刘太国, 刘 博, 陈万权

(中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193)

原生质体法介导真菌遗传转化体系是实现大规模随机、定点突变和菌种改良的方法之一,为研究真菌致病性和侵染机制奠定了基础。原生质体法构建转化体系的步骤包括原生质体的制备、转化与再生,其中关键是原生质体的制备,通常采用酶解法破除细胞壁获得原生质体,其获得率直接影响转化效率。转化通常借助于聚乙二醇(PEG)介导、电击或限制性内切酶法完成,其中PEG介导的原生质体转化法较传统,技术较成熟;电击法操作较简单;限制性内切酶(REMI)介导的整合转化,因其转化效率较高,可产生大量稳定的转化子,正被越来越多地应用于丝状真菌的遗传转化。

原生质体; 制备与再生; PEG介导; 电击; REMI; 转化子

随着真菌分子生物学研究的迅速发展,越来越多的真菌全基因组序列测序成功,真菌生物学研究进入了功能基因组学时代,对能够实现大规模随机和定点突变技术的需求日益增加。遗传转化技术是实现大规模随机和定点突变的重要方法之一,利用该技术可改变真菌的遗传物质,可为深入研究真菌的某些代谢及生理现象提供方法,还可致力于解析真菌的致病机理。……