王 冉

华北制药集团河北华民药业有限责任公司 河北省石家庄市 052165

HPLC法测定头孢噻肟钠中2-巯基苯并噻唑（M）残留量

王 冉

华北制药集团河北华民药业有限责任公司 河北省石家庄市 052165

目的：建立HPLC法测定头孢噻肟钠中2-巯基苯并噻唑（M）残留量。方法：采用高效液相色谱法，样品经萃取处理后测定。色谱柱为依利特BDS C18(4.6mm×150mm，5.0μm);流动相为pH6.25磷酸盐缓冲液-甲醇(60：40）;检测波长为315nm，柱温为25℃。萃取剂为三氯甲烷。结果：M的质量浓度在0.5μg/ml-7.5μg/ml范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9998，n=7);平均回收率为107%（n=9)。结论：该方法快速、灵敏，结果准确可靠，可用于头孢噻肟钠中M的检测。

HPLC；头孢噻肟

头孢噻肟为第三代头孢菌素，抗菌谱广，临床上主要用于各种敏感菌的感染。我公司在生产头孢噻肟钠的过程中使用AE活性酯与7-ACA反应，M为以氨噻肟酸和二硫化二苯并噻唑为起始原料生产AE活性酯的副产物，可能会在头孢噻肟钠里残留。M为基因毒性杂质，根据EMEA人用药品委员会（CHMP）关于基因毒性杂质的限度指南规定及头孢噻肟钠最大日剂量可以计算得出，M每日允许摄入量为5μg/ g。测定M的方法有高效液相色谱法。如果采取直接进样法，需要配备灵敏度更高的质谱检测器才能对其进行定量检测。本文通过对样品中的M进行萃取法富集，然后采用HPLC（UV检测器）进行定量测定，建立了头孢噻肟钠中的M残留定量检测方法。

图1：M对照品

1 试剂

头孢噻肟钠，华北制药河北华民药业有限责任公司提供，批号为C2081510044、C2081510045、 C2081510046；M，分析纯，阿拉丁，批号为F1206015，含量98.1%；甲醇，色谱纯，上海星可生化，批号为021250801。

2 方法与结果

（1）色谱条件，色谱柱。依利特BDS C18(4.6mm×150mm，5.0μm)；柱温25℃；检测器波长315nm，

流速1.2ml/min。

（2） 对照品溶液制备。精密称取M约25mg，置100ml容量瓶中，加三氯甲烷使溶解并定量稀释至刻度。精密吸取1.0ml于50ml容量瓶中，用流动相定量稀释成5µg/ml M对照品溶液。

（3） 样品溶液制备。精密称取头孢噻肟钠供试品约2.0g，精密加入10.0ml纯化水使溶解，精密加入三氯甲烷2.0ml，剧烈振摇1分钟，静置，取下层溶液，以孔径0.45µm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

（4）专属性测试，经测试，空白溶液对主峰测定无干扰。对照品溶液中，只有M峰，满足M峰与相邻杂质峰间的分离度>1.5的要求。供试品溶液中，M峰与相邻峰间的分离度为13.4，满足M峰与相邻杂质峰间的分离度R>1.5的要求。

（5） 检测限和定量限。当信噪比（S/ N）为3:1时，M的浓度为0.014µg/ml，即为检测限；当信噪比（S/N）为10:1时，M的浓度为0.036µg/ml，即为定量限。

（6）重复性。按照2.3项下操作，平行制备6组样品溶液，经测试，M结果平均值为1.69334ppm，RSD为1.3%。

（7）中间精密度按照色谱条件，采用不同人员不同时间进行样品测定，各组样品溶液M含量测定值的平均值为1.55135ppm，RSD为8.2%。

（5）样品中M的残留量测定。分别称取三批头孢噻肟钠样品2.0g按照2.3项下操作，进样分析。结果见表1。

表1：样品检测结果

3 讨论

（1）本实验建立了HPLC（紫外检测器）检测头孢噻肟钠中M残留量的方法，以外标法进行计算，该方法具有检测限低(ppm级)，准确度及精密度高，样品检测时间短（10min）的优势。

（2） 因三氯甲烷易挥发，样品溶液需要临用新制并密封保存，否则会导致检测结果偏高。

（3） 供试品进行萃取时注意一定要振摇1min，否则萃取不完全，会使检测结果偏低。

[1]毛树禄,吕培其,张元金,李小娅,陈敬华.高效液相色谱法测定橡胶制品中2-巯基苯并噻唑[J].理化检验(化学分册),2014(10):1242-1244.

王冉，女，现供职于华北制药集团河北华民药业有限责任公司，从事药品检测方面的研究。