□ 孙旭峰 广州市番禺质量技术监督检测所

液相色谱法检测食品中水溶性维生素

□ 孙旭峰 广州市番禺质量技术监督检测所

维生素是维持人体正常机能不可或缺的营养物质，然而部分维生素在人体体内无法合成，或合成量不能满足机体需要，这就需要从外界摄取一定量的营养强化食品，以满足人体正常机能的生长需要。根据溶解度的不同，维生素分为水溶性和脂溶性两类，水溶性维生素主要有维生素C、B1（硫胺素）、B2（核黄素）、B3（烟酰胺、烟酸）、B5（泛酸）、B6（吡哆醇、吡哆胺、吡哆醛）、B7（生物素）、B11（叶酸）和B12（钴胺素）。不同水溶性维生素的结构化特征差异较大，化学性质较不稳定，分离检测较为复杂困难，多采用高效液相色谱法测定。在普通高效液相色谱的基础上研究出一种新型检测方法，即超高效液相色谱法，不仅在分离测定有机物占据更大的优势，而且在检测食品中多种水溶性维生素的效果较明显。

高效液相色谱仪测定食品水溶性维生素的过程分析

设备与材料

（1）设备。高效液相色谱仪WAterS1525；超纯水机Mi l li-Q；高速台式离心机tGL-10B，上海安亭科学仪器厂tGL-10B；智能控制超声波清洗仪GT-2013 Q TS，深圳固特。

（2）材料。乙腈，色谱纯，美国FiSherSCien ti fiC公司；磷酸二氢钾，特级纯，日本东京化成工业株式会社；其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

（3）配制标准储备液。称取吡哆醇、烟酰胺、泛酸钙、氰钴胺、硫胺标准样品50m g，丙酮定容，配制成质量浓度2m g/m L的储备液；称取维生素C样品250m g，丙酮定容，配制成质量浓度为10m g/m L的储备液；称取维生素功能饮料制品、复合维生素片、维生素营养强化大米各50m g，丙酮定容，配制成质量浓度为2m g/m L的储备液；储备液避光，置于4 ℃冰箱。

（4）样品处理。吸取30m L维生素功能饮料样品，经0.45μm微孔滤膜过滤后分析；若干复合维生素片剂碾压至粉末状，称取2g，丙酮定容，超声提取25 mi n，超声提取液0.45μm微孔滤膜过滤备用；维生素C用超声提取液0.45μm微孔滤膜后备用。

半制备型技术参数分析

（1）色谱柱。S u n fireC185μm，4.6×1 50m m；流动相A：25 m mol/L磷酸二氢钾缓冲液，PH调至2.5；B：乙腈；采用二元高压梯度泵：双柱塞并联补偿往复泵，采用非圆齿轮技术，自调芯柱塞；两种溶剂经二元溶剂泵后高压混合，流速控制在0.001~22.5 m L/mi n，最大耐受压力为4.1×104kPA；柱温：30℃；自动进样器：四通阀方式；进样体积：25 μL。

（2）检测波长。紫外可见检测器（2489），可变波长为190～700 n m，可见光源为氚灯；光谱带宽为5 n m，采样速率控制在80H z，四个波长分别为25 6.7、379.0、521.5、656.1 n m。通过对多种维生素在波长区间内的紫外光谱扫描，得到维生素的最大吸收379.0 n m波长作为检测的最佳波长。

（3）优化色谱条件。维生素C、烟酰胺等几种物质以离子形式存在于水溶液中，不易长时间停留在C18色谱柱上，一般实验室会采用在流动相内加入磺酸盐离子对试剂的方法延长维生素的极性保留时间，然而离子对试剂会破坏色谱柱的平衡性，导致分析物发生漂移运动，从而降低定性定量结果的分析准确率。但在本实验中采用离子交换机，增强离子在色谱柱中的稳定性，保证分析物发生漂移运动，从而提高定量结果的分析准确率。

表1 功能饮料样品加标回收率表

表2 复合维生素片样品加标回收率表

结果分析

精密度分析

准确量取100倍稀释度的维生素标准储备液，分别进行6次重复性试验，各组分的色谱峰面积标准偏差为0.7 5%、0.25%、1.1 8%、0.8 3%、0.4 5%和1.0 5%，保留时间标准偏差为0.7 5%、1.6%、1.2%、1.5 5%、1.7 8%和2.0 5%，充分证明该方法检测结果的精密度良好。

加标回收率分析

向功能饮料、复合维生素片中添加一定浓度的上述储备标准液，进行加标回收率的测定，结果见表1～23。