陈 云，于一帆，潘淑芬，周 研，葛会敏，刘立军

(扬州大学 江苏省作物遗传生理重点实验室，江苏 扬州 225009)

甘蓝型油菜异三聚体G蛋白原生质体瞬时表达体系的建立

陈 云，于一帆，潘淑芬，周 研，葛会敏，刘立军

(扬州大学 江苏省作物遗传生理重点实验室，江苏 扬州 225009)

为建立甘蓝型油菜异三聚体G蛋白各组分原生质体瞬时表达体系，以油菜叶片为试材，从试材选取、平摇时间和聚乙二醇浓度方面优化了油菜原生质体制备条件和转化条件。结果表明，选取30 d苗龄叶片、平摇10 min时原生质体游离状态最佳，产量为10.73×106/mL，活力可达96.4%。采用30% PEG转化原生质体时，目的蛋白表达量最高。 Western Bolt的检测分析表明，异三聚体G蛋白各组分均参与了甘蓝型油菜对ABA的应答反应，当ABA浓度分别为100，150，100，50 mmol/L时，BnGA1、BnGB1、BnGG2和BnRGS1蛋白的表达量最高。

油菜；原生质体瞬时表达；异三聚体G蛋白

异三聚体G蛋白(简称G蛋白)介导的信号转导途径是真核生物最为保守的信号转导途径之一。G蛋白包括3个亚基(Gα、Gβ和Gγ)以及1个G蛋白调节蛋白(RGS蛋白)。目前，已经在拟南芥、水稻、玉米、大豆、油菜等十几种植物中发现了G蛋白。在模式植物拟南芥和水稻中的研究表明，G蛋白参与了植物生长发育的诸多过程，包括种子萌发、侧根和顶端钩形成、下胚轴生长、叶片伸展，在植物响应生物和非生胁迫中起着十分重要的调节作用[1-2]。Gao等[3-5]于2010年先后在甘蓝型油菜中分离和鉴定出了G蛋白的α亚基、β亚基和γ亚基，江苏省作物遗传生理重点实验室于2013年鉴定出了BnRGS1蛋白[6]。通过分……