唐明青， 张文豪,2， 侯莹， 成志云，郭思佳， 王立振， 刘慧， 许瑞安

(1. 华侨大学 生物医学学院， 福建 泉州 362021；2. 福建医科大学 基础医学院， 福建 福州 350108)

超滤法去除重组腺相关病毒中内毒素的应用

唐明青1， 张文豪1,2， 侯莹1， 成志云1，郭思佳1， 王立振1， 刘慧1， 许瑞安1

(1. 华侨大学 生物医学学院， 福建 泉州 362021；2. 福建医科大学 基础医学院， 福建 福州 350108)

为探讨超滤法在重组腺相关病毒精制中的可行性，采用不同截留分子量的超滤管对重组腺相关病毒样品rAAV9-Kal进行超滤处理.利用鲎试剂盒和qPCR法定量检测截留液和滤过液中的内毒素和病毒含量，评价超滤技术对样品中内毒素的去除效果.结果表明：在乙二胺四乙酸二钠和脱氧胆酸钠的预处理下，30 kD的超滤管对样品的回收率及内毒素去除率分别为0.912 2，0.870 6.因此，在单一超滤条件下，30 kD的超滤管是重组腺相关病毒样品超滤纯化的最佳选择. 关键词： 重组腺相关病毒； 超滤； 截留分子量； 内毒素； 纯化

重组腺相关病毒(rAAV)属于微小病毒科的单链DNA病毒，具有天然非致病性、免疫原性低、宿主范围广、可转染分裂细胞和非分裂细胞及介导外源基因长期表达等特性，是最有前景的基因治疗载体之一[1].目前,基于rAAV的基因治疗药物Glybera已率先在欧盟上市[2].内毒素(ET)是由革兰氏阴性菌细胞壁裂解释放的脂多糖类物质，极微量(1～5 ng·kg-1)的内毒素作用于机体内的内生致热原生成细胞即可导致机体发热，大剂量可引起血液循环障碍和内毒素休克[3].在rAAV制备过程中,一个重要的……