任振波，候毅锐，郑 伟，张 雷，虞 微，黄 琳

(解放军第208医院，吉林 长春130062)

表达CD20的正常B细胞对CD20特异cTCR+T细胞抗白血病活性的影响

任振波*，候毅锐，郑 伟，张 雷，虞 微，黄 琳

(解放军第208医院，吉林 长春130062)

急性淋巴细胞白血病(ALL)为预后极差的一种类型急性白血病。既往治疗以化疗为主，生存期极短。造血干细胞移植(HSCT)为唯一能治愈本病的方法，但由于缺乏配型相合供体及资金等，HSCT也只能挽回少部分ALL患者的生命。近20年来国外研究的用嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)[1]治疗ALL已有成功的报道，且没有移植物抗宿主病副作用，具有广泛的应用前景，有取代HSCT成为治疗B-ALL、CLL、NHL的一种新的方法的趋势。

经过20多年的发展，CAR-T的设计已经越来越完善，但仍存在许多问题。如on-target效应(靶效应)(肿瘤溶解综合征、细胞因子风暴、巨细胞综合征、神经毒性、B细胞缺如及低丙种球蛋白血症)；off-target(脱靶效应)等。输注细胞前是否需要进行预处理及用什么方法进行预处理能否解决on-target效应还未确定。国内开展的中心很少。据Anupama Ahuja[2]报道鼠B细胞减少可以抑制系统性免疫反应，并研制了表达CD20的B细胞转基因鼠，应用大剂量鼠抗人CD20单抗导致B细胞明显减少，取得了明显的临床疗效。我们设想在输注CAR-T细胞前给予抗CD20抗体进行预处理减少B淋巴细胞，观察CAR-T细胞的活性及抗肿瘤效果。

1 材料与方法

1.1 动物、细胞系

Thy1.2+野生型(WT)鼠，人CD20(hCD20)转基因鼠、Leu16+T细胞、CL4细胞TCR转基因鼠和Thy1.1+和Thy1.2+Bbalb/c鼠购自美国The Jackson Laboratory。hCD20特异cTCR+T细胞；MB185- hCD20/Thy1.1-ffLuc-Neo肿瘤细胞，Thy1.1+Leu16+CD8+T细胞，Leu16+CD8+T细胞，Thy1.1+Leu16+T细胞。

1.2 试剂和仪器

荧光偶联抗体：mCD4，mCD8，hCD20，Thy1.1，CD3，CD28购自BD Bioscience。

抗hCD20由ATCC(American type culture collection)。杂交瘤HB-9645用FRCRC(Fred Hutchinson cancer Reserch center)生物设备进行。……