陈楠楠，叶丽丽，王华欣，祝婧，乔波，赵静虎，刘通，岳山，周金玲，刘宇，朱战波

（1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319；2.黑龙江省兽医科学研究所）

牛粪发酵沼液中产甲烷菌的分离及分子鉴定

陈楠楠1，2，叶丽丽1，王华欣1，祝婧1，乔波1，赵静虎1，刘通1，岳山1，周金玲1，刘宇1，2，朱战波1

（1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319；2.黑龙江省兽医科学研究所）

为了确定牛粪发酵沼液中疑似菌株的生物特性和种属关系。采用Hungate滚管技术、厌氧培养、革兰氏染色镜检、PCR扩增技术和抗生素耐受性鉴定等方法进行分析。实验结果表明，牛粪发酵沼液分离到了一株革兰氏阳性菌，能够利用CO2，最适生长温度为37℃，单独或成对存在。菌落呈灰白色，光滑，表面凸起。PCR扩增出1 200 bp的16S rDNA片段，测序结果表明，该分离菌为产甲烷短杆菌。

产甲烷菌；厌氧培养；沼气

产甲烷菌（methanogen）是一类以产生大量甲烷气体作为能量代谢的终产物的特殊原核微生物，广泛存在于各种极端厌氧环境中，如反刍动物的瘤胃和沼气反应器等人为环境中[1]，沼气发酵过程是一个由多种微生物联合，交替作用的复杂生化过程[2]。沼气发酵微生物种类繁多，分为不产甲烷群落和产甲烷群落[3]，并且，在沼气发酵过程中，产甲烷菌是关键微生物[4]。人们在以往有关沼气发酵微生物的研究中重点关注沼气发酵三个阶段及各阶段中不同微生物的作用[5-6]，发现沼气发酵限速步骤是产甲烷阶段[7]，而其中起主导作用的是产甲烷菌。产甲烷菌作为自然界碳素循环中厌氧生物链的最后一个成员，分析沼气发酵过程中产甲烷菌的变化，对于自然界中的其他许多循环具有不可估量的推动力[8]。……