马珍琼龚云麒屈云莲张恒普俊学

【摘 要】 目的：测定脱氧土大黄苷的平衡溶解度及表观油水分配系数。方法：采用紫外分光光度-摇瓶法测定脱氧土大黄苷在有机溶剂、水及不同pH磷酸盐缓冲盐中的平衡溶解度和其在正辛醇-水/磷酸盐缓冲盐溶盐中的表观油水分配系数。结果：在温度37℃时，脱氧土大黄苷在水中的溶解度为01217mg/mL，乙醇和正辛醇对脱氧土大黄苷的溶解性较好，其溶解度分别为121146mg/mL和72867mg/mL，在不同pH的磷酸盐缓冲溶液中随着pH的升高其溶解度变化无规律；脱氧土大黄苷在正辛醇-水中的表观油水分配系数Papp为13852（lgP=214）；当pH在1～8的磷酸盐缓冲溶液中时，受pH影响几乎无变化，表现为亲脂性。结论：脱氧土大黄苷在水中的平衡溶解度差，受介质的pH影响，且油水分配系数高。因此，在制剂过程中，可通过改变pH增加药物的溶解性和稳定性。其测定结果为进一步研究脱氧土大黄苷的制备、制剂及其在生物体内外的吸收、分布和代谢过程提供重要的参考和依据。

【关键词】 脱氧土大黄苷；平衡溶解度；紫外分光光度法；表观油水分配系数

【中图分类号】R914 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）23-0039-04

脱氧土大黄苷为拉萨大黄中的主要成分之一，属脂溶性茋苷类化合物。研究显示：脱氧土大黄苷具有多种药理活性，如清除自由基、抗氧化、抗菌、抗炎、改善和治疗缺血性心脑血管疾病等[1-3]。药物吸收进入血液需要合适的溶解度和油水分配系数，以便能透过生物膜的脂质双分子层[4]。药物的溶解度与油水分配系数可预测药物在体内吸收、分布、代谢等，也可为制剂给药途径选择、剂型选择、处方筛选、工艺设计及生物药剂学等研究提供依据。

目前，脱氧土大黄苷的研究主要集中制备及药理方面，而理化性质研究报道尚少。研究采用紫外分光光度-摇瓶法测定脱氧土大黄苷在水及不同pH缓冲液中、温度在37℃下的平衡溶解度和油水分配系数[5-6]，为脱氧土大黄苷体内外吸收、制剂开发及其他相关药学研究提供数据支持和参考。

1 仪器与材料

11 仪器 UV-2450紫外分光光度计（日本岛津公司）；SW22恒温震荡仪（德国Julabo公司）；FE20实验室pH计（梅特勒-托利多公司）。

12 试剂试药 脱氧土大黄苷对照品（昆药集团股份有限公司药物研发平台自制，20160421）；乙醇（天津市风船化学试剂科技有限公司，20141002）、甲醇（天津市风船化学试剂科技有限公司，20141201）、磷酸（广东省化学试剂工程技术研究开发中心，20141002）、氢氧化钠（天津市风船化学试剂科技有限公司，20131108）、磷酸二氢钠（天津市风船化学试剂科技有限公司，20140202）、磷酸二氢钾（天津市风船化学试剂科技有限公司，20130625）、磷酸氢二钾（天津市风船化学试剂科技有限公司，20130722）、正辛醇（天津市津东天正精细化学试剂厂，20150112）等均为分析纯，水为自制重蒸水。

2 方法与结果

21 脱氧土大黄UV检测方法的建立

211 样品储备溶液的配制 称量脱氧土大黄苷对照品适量，精密称定103mg于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度作脱氧土大黄苷对照储备液。

212 最大吸收波长的确定 取脱氧土大黄苷对照储备液适量，用甲醇不断稀释，在波长190～800nm的波长范围内扫描，其吸光度值在03～07之间，其最大吸收波长为319nm。见图1。

213 脱氧土大黄苷标准曲线的建立 精密移取脱氧土大黄苷对照储备液1、1、5、6、2、5mL分别于50、25、100、100、25、50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度制得浓度分别为206、412、513、618、824、103μg/mL的标准溶液，照紫外分光光度法，在波长319nm处，用紫外分光光度计分别测定其吸收度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程为：Y=0076x-000875，R2=099997，表明脱氧土大黄苷在浓度206～103μg/mL范围内吸光度与浓度呈良好线性关系。

214 精密度考察 按“标准曲线”法，配制浓度为513、618、824μg/mL的脱氧土大黄苷溶液，在319nm处测定各溶液的吸光度，每个浓度平行测定6次，计算其精密度，结果分别为：01856%、01983%、01792%，均小于10%，结果表明该测定方法精密度良好。

215 加样回收率考察 按“标准曲线”法，分别量取脱氧土大黄苷对照储备液和样品储备液适量配制成浓度为80%、100%、120%的脱氧土大黄苷溶液，每个浓度配制3份，和3份样品溶液在319nm处测定各溶液的吸光度，带入标准曲线计算得到对应的质量浓度，按公式：准确度=测定质量浓度值/真实质量浓度值×100%，计算各浓度下的平均回收率，结果分别为：1013%、998%、987%，结果表明该测定方法准确度良好。

216 稳定性实验 精密量取脱氧土大黄苷对照品溶液3mL于50mL容量瓶中，分别加水和pH为12的磷酸溶液超声溶解并定容至刻度50mL，分别精密取2mL于50mL容量瓶中，分别用水和pH为118的磷酸溶液定容至刻度50mL，制得浓度为618μg/mL的对照品溶液，放于室温，分别于0、2、8、12、24、36、48h取样照紫外分光光度法测定其吸光度，测定结果的RSD分别为：101%、132%，均小于20%，结果表明，在48h内，脱氧土大黄苷在水中和pH为118的磷酸溶液中稳定。

22 平衡溶解度测定

221 不同pH磷酸缓冲液的配制 按《中华人民共和国药典》2015年版第四部配制pH 12的磷酸溶液及pH 20、30、40、50、60、70、80的磷酸盐缓冲液，并用磷酸和磷酸氢二钠调节pH，最终用pH计验证其pH为118、203、305、406、503、605、705、802。

222 脱氧土大黄苷在水及不同pH缓冲液中的平衡溶解度测定 称取脱氧土大黄苷300mg数份，置于50mL具塞三角瓶中，分别加入水，不同pH值的磷酸缓冲液20mL，每种溶剂平行操作3份，置于（37±05）℃的恒温水浴中，以150r/min匀速震振摇48h至药物不再溶解。将饱和脱氧土大黄苷溶液用045μm微孔滤膜过滤，取续滤液做适当稀释后，按照紫外分光光度法进行测定，记录其数据，并计算其平衡溶解度，结果如表2。于24h时脱氧土大黄苷的浓度为平衡溶解度，做出其在不同缓冲液中的平衡溶解度曲线，如图2。

由图2可知，溶剂的pH对脱氧土大黄苷的平衡溶解度影响较大，随着pH的不断增加，其平衡溶解度先降低后增加的趋势。

于不同时间点取样测定脱氧土大黄苷的浓度为平衡溶解度，做出其在水中不同时间的平衡溶解度曲线，如图3。

由图3可知，脱氧土大黄苷的平衡溶解度随着时间增加逐渐增加，其平衡溶解度于2h趋于平衡。

23 表观油水分配系数测定

231 水饱和正辛醇溶液及正辛醇饱和水溶液的配制量 取200mL正辛醇和250mL蒸馏水于具塞三角瓶中。恒温振荡24h，使其混合均匀，相互饱和后，于分液漏斗中，静置过夜分层，分离两相，将两相界面附近的溶液弃去，并将上层的水饱和正辛醇溶液和下层的正辛醇饱和水溶液保存备用。

232 脱氧土大黄苷在正辛醇-水及不同pH缓冲液中的表观油水分配系数测定 称取脱氧土大黄苷100mg，精密称定为01058mg于50mL容量瓶中，用水饱和正辛醇溶解并定容，配成浓度为2116mg/mL的溶液，分别量取该溶液20mL于具塞三角瓶中，再分别加入被正辛醇饱和的水和pH20、30、40、50、60、70、80的磷酸盐缓冲液20mL，放入（37±05）℃恒温水浴振荡仪中振摇24h后取出，以4000r/min离心30min分别取上、下层溶液，照紫外分光光度法在319nm波长处测定其吸光度，根据公式Papp=Co/Cw计算其油水分配系数。公式中Papp为各介质下的表观油水分配系数、Co为脱氧土大黄苷在正辛醇中分配平衡时测得的浓度，Cw为脱氧土大黄苷在水相中分配平衡时测得的浓度。脱氧土大黄苷在水和不同pH缓冲液饱和的正辛醇/正辛醇饱和的水和不同pH缓冲液中表观分配系数如表3。

3 讨论

目前，平衡溶解度和油水分配系数测定的方法很多，如摇瓶法、HPLC法和产生柱法，其中以摇瓶法最为简便。本研究采用紫外分光光光度-摇瓶法测定脱氧土大黄苷的平衡溶解度和油水分配系数[7-9]，此方法操作简便、省时、经济，且得到的线性、精密度和回收率均符合《中国药典》要求，表明该方法测定脱氧土大黄苷的平衡溶解度和油水分配系数可行。

人体的生理环境大致在pH20～80，参照中国药典及相关文献中缓冲液的pH范围，并设计考察脱氧土大黄苷在pH 118、203、305、406、503、605、705、802下的磷酸缓冲盐中的平衡溶解度和表观油水分配系数，模拟药物在生物体内（水相）和生物相（油相）间的分配情况。在研究中大多采用有机溶剂来模拟生物相（油相），如：正辛醇、橄榄油和氯仿等。正辛醇是被公认为更接近生物相的有机溶剂，其原因主要是因为其溶解度为2107MPa，接近于生物膜的溶解度参数[10]，其可作为模拟生物相的有机溶剂。因此，本实验研究采用正辛醇-水为模拟系统测定油水分配系数。

研究表明，温度在37℃下，脱氧土大黄苷的油水分配系数P为13852（lgP=214），表现为疏水性，容易透过生物体细胞膜而进入体内被吸收，这不是限制脱氧土大黄苷在体内外吸收的重要原因。而其在水中的平衡溶解度仅为01217mg/mL，药物的水溶性差导致其在体内的溶出速度慢。因此，其溶解度是体内外吸收转运的限速因素，是制剂过程中应该解决的首要问题。本文对脱氧土大黄苷进行平衡溶解度及表观油水分配系数的测定，不仅可为脱氧土大黄苷的体内、体外吸收代谢及分离制备等研究提供参考，为脱氧土大黄苷进一步制剂处方工艺研究提供数据支持和指导。

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（编辑：梁志庆）