禹婷婷，黄 勇，张 樑，张洪玲，王振宇，赵志敏，童德文

(西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100)

猪细小病毒VP2的原核表达与多克隆抗体制备

禹婷婷，黄 勇，张 樑，张洪玲，王振宇，赵志敏，童德文*

(西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100)

克隆猪细小病毒(PPV)VP2基因全长1 740 bp，构建其原核表达载体后进行蛋白的表达与纯化，接种家兔制备多克隆抗体。用PCR方法扩增PPV VP2全长基因，扩增产物克隆至表达载体pET-32a并转化至E.coliBL21(DE3)感受态中。分别用不同诱导时间、IPTG浓度、温度诱导表达VP2重组蛋白，经SDS-PAGE电泳切胶回收纯化目的蛋白。对家兔进行3次免疫后，采集血清制备抗体。PCR扩增得到1 740 bp的VP2基因片段；构建原核表达载体pET-32a-VP2，经37℃，IPTG浓度1.0 mmol/L诱导表达4 h可得分子质量大小约为82 ku目的蛋白；间接ELISA检测抗体效价可达1∶12 800；Western blot证明所制备的抗体能够有效的应用于PPV VP2抗原的检测。本研究成功构建了表达PPV VP2基因的原核载体，获得了VP2蛋白，制备了兔抗多克隆抗体，为建立检测PPV VP2蛋白ELISA方法奠定了基础。

猪细小病毒；VP2蛋白；原核表达；多克隆抗体

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍及仔猪多系统衰竭综合征的重要病原之一，临床上常与其他导致母猪繁殖障碍的病原混合感染而致病，给养猪业带来了严重的损失[1-2]。猪细小病毒病常以妊娠母猪流产、死胎、畸形胎、胎儿木乃伊化及弱仔等一系列症状为特征，目前该病在欧洲、美洲、亚洲等多个国家均有流行与报道[3]。我国在1984年首次分离到PPV，随后相继在上海、四川、广西、黑龙江、天津、湖北等地分离到该病毒，表明PPV呈全国性分布，且国内猪群PPV感染率很高，严重威胁到了我国养猪业的发展[4]。……