付梦姣 ， 王永强 ， 曹 红 ， 李晓齐 ， 郑世军

(中国农业大学动物医学院农业生物技术国家重点实验室 ， 北京海淀100193)

禽IL-2单克隆抗体的制备与鉴定

付梦姣 ， 王永强 ， 曹 红 ， 李晓齐 ， 郑世军

(中国农业大学动物医学院农业生物技术国家重点实验室 ， 北京海淀100193)

为制备禽源IL-2的单克隆抗体，首先构建chIL-2的原核表达载体并进行表达，用HIS-IL-2蛋白免疫BALB/c小鼠，经3次免疫后，取小鼠脾与骨髓瘤细胞sp2/0 融合，应用间接ELISA 方法筛选阳性杂交瘤，最终获得3 株稳定分泌chIL-2 抗体的杂交瘤，分别命名为1C2，2F2和4B5。并对所获得单抗的特性进行了鉴定，结果表明，3株单抗亚型均为IgG1，抗体亲和力解离常数(Kd)分别为4.81×10-10、1.36×10-10、4.15×10-9，均为高亲和力抗体，经过Western Blot 确定3株单抗分别识别chIL-2的不同区域，且均能特异性识别chIL-2。该单抗的制备为chIL-2的功能研究和应用奠定了基础。

禽源IL-2 ； 原核表达 ； 单克隆抗体

IL-2(Interleukin-2)主要是由T细胞产生的具有重要免疫调节作用的细胞因子。1976 年Morgan 等[1]发现小鼠脾细胞培养上清液中有一种能够促进和维持T 细胞在体外长期生长的因子，将其称为T 细胞生长因子(T cell growth factor，TCGF)，1979 年统一命名为IL-2，1983 年Taniguchi等[2]从ConA 刺激的Jurkat T 细胞系中首次成功克隆出人IL-2 基因并成功表达，此后多种哺乳动物及反刍动物的IL-2 基因被相继成功克隆出来[3]。1997 年，Sundick 等[4]用ConA 激活的鸡脾淋巴细胞构建了一个cDNA 文库，获得了鸡IL-2 基因。Hilton 等[5]的研究表明，作为第一个非哺乳动物IL-2 基因克隆，鸡IL-2 表现了与哺乳动物相似的生物学活性。由于鸡IL-2 与哺乳动物的IL-2差异较大，且具有很强的种属特异性[6-7]，使许多可在哺乳动物中成功应用的技术和方法都无法有效地应用于鸡IL-2 的研究，本研究通过制备鸡IL-2单克隆抗体，为深入研究鸡IL-2的生物学功能奠定基础。……