王缉明，李帅鹏，黄显会*

（1.华南农业大学兽医学院，广东 广州 510642；2.内蒙古金河动物药业有限公司，内蒙古 托克托 010200）

复方替米考星可溶性粉在鸡体内的药动学研究

王缉明1，李帅鹏2，黄显会1*

（1.华南农业大学兽医学院，广东 广州 510642；2.内蒙古金河动物药业有限公司，内蒙古 托克托 010200）

本研究比较了口服复方替米考星可溶性粉与单独肌注替米考星注射液和静注磺胺二甲嘧啶钠注射液在鸡体内药物代谢动力学特征和相对生物利用度。36只健康鸡，随机分为3组，给药剂量均为20 mg/kg，翼下静脉采血，高效液相色谱法检测鸡血浆中的药物浓度。采用药动学软件WinNonlin 6.1的非房室模型分析方法，计算出药物的动力学参数。鸡口服复方替米考星可溶性粉、肌注替米考星注射液和静注磺胺二甲嘧啶钠注射液后的药时曲线下面积（AUC）分别为：9.49±3.64、37.17±10.82、12.40±4.11、61.31±11.38 μg×h/mL。复方替米考星可溶性中替米考星相对于肌肉注射的替米考星的生物利用度为75.98%，复方制剂中磺胺二甲嘧啶钠的绝对生物利用度为60.63%。复方替米考星可溶性粉和单方药物相比，药动学参数经t检验，t1/2、Tmax、Cmax、AUC、MRT等存在显著性差异（P＜0.05）。结果表明复方替米考星可溶性粉单剂量口服给药吸收较慢，达峰时间显著延迟，平均驻留时间显著延长，有利于抗菌作用的发挥。

复方替米考星可溶性粉；磺胺二甲嘧啶钠；药动学；生物利用度；鸡

替米考星属于畜禽专用的大环内酯类抗生素，是泰乐菌素的衍生物。20世纪80年代由英国Elanco动物保健品公司首先研发，目前已在多个国家被批准动物临床使用，主要用于防治畜禽呼吸道感染[1-6]。磺胺二甲基嘧啶属于磺胺类抗生素，是磺胺类药物中抗菌作用最强的药物之一[7]，对多数革兰氏阳性菌、阴性菌和许多原核生物均有抑制效果，具有抗菌谱广、抗球虫和价廉易得等优点，在兽医临床和畜牧业中广泛应用，用于治疗巴氏杆菌病、子宫内膜炎、呼吸道、消化道及泌尿道感染[8]。但是，由于近年来药物的不规范使用，细菌耐药性逐渐增强，混合感染病例的不断增加，导致替米考星和磺胺二甲嘧啶单独用于疾病防治的效果也在减弱。这给疾病的防治带来了很大困难，所以迫切需要能对多种病菌起作用的复方制剂。替米考星和磺胺二甲嘧啶联合使用可有效扩展抗菌谱，减少给药次数，减少耐药性的发生率，发挥更好的疗效，并且药物采用饮水给药，应用方便易操作[9-11]。因此，本课题研究了复方替米考星可溶性粉在鸡体内的药物代谢动力学过程，为制定临床合理给药方案、指导临床合理用药提供依据。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂

1.1.1 仪器与设备 美国Waters公司高效液相色谱仪（配紫外检测器、四元泵、脱气泵、自动进样器、柱温箱等）；美国Thermo公司高速冷冻离心机；Milli-Q超纯水系统；上海青浦沪西仪器厂XW-80A旋涡混合仪；高精度电子天平（1/10万型）为赛多利斯公司等。

1.1.2 试剂 甲醇、乙腈、四氢呋喃均为色谱级；磷酸、正二丁胺、正己烷、二氯甲烷等均为国产分析纯试剂；水为试验室自制超纯水。

1.1.3 对照药品 替米考星注射液（批号20120312，规格：30%）、磺胺二甲嘧啶钠注射液（批号12021701，规格：10%），均由上海公谊兽药厂提供。替米考星对照品：含量90.3%，批号：K0310305，中国兽医药品监察所。磺胺二甲嘧啶对照品：含量99.8%，批号：H0371005，中国兽医药品监察所。

1.1.4 供试药品 复方替米考星可溶性粉（批号：12041501，主要成分为5%替米考星、5%磺胺二甲嘧啶钠），华南农业大学兽医药理研究室自制。

1.2动物与分组36只健康的三黄肉鸡，购于华南农业大学试验鸡场，雌雄各半，体重1.8 kg左右（8周龄左右）。按常规饲养，自由饮水和采食，饲料为全价日粮，不含抗菌药物。临床观察2周表现健康。36只鸡随机分为3组，每组12只，分别进行了口服复方替米考星可溶性粉、肌注替米考星注射液和静注磺胺二甲嘧啶钠注射液。试验前16 h起及给药后4 h期间禁食，仅自由饮水。

1.3给药和血液采集复方替米考星可溶性粉组，按含有效成分替米考星20 mg/kg体重的剂量，将药物溶于水中，采用灌胃给药方式给药，灌药后鸡禁食4 h，期间保障饮水；肌注替米考星注射液组和静注磺胺二甲嘧啶钠注射液组分别采用胸部肌肉注射、翅下静脉注射；每种药物的给药剂量均为20 mg/kg（根据复方替米考星可溶性粉的使用浓度，鸡，每1 L水加2 g本品，按每只鸡每天饮水量为体重的20%计算，灌服剂量为每天20 mg替米考星/kg）。鸡只侧卧保定，从另一侧翅下静脉采血，给药前采1次空白血。分别于给药后0.083（仅静注）、0.167（内服除外）、0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12、16（内服除外）、24、48、72 h鸡翅下静脉采血约1.5 mL，置于含肝素的离心管中，4 000 r/min离心10 min，分离血浆，-20℃冰箱保存，待测。

1.4样品的处理与测定从冰箱中取出血浆，自然解冻，摇匀。准确吸取血浆0.5 mL于10 mL塑料离心管内，加入2.5 mL提取液，涡旋1 min后6 000 r/min离心10 min，取上清液于10 mL玻璃管中，重复提取1次，合并两次上清液。置35℃水浴下氮气吹干，0.5 mL流动相溶解并涡旋1 min后，过0.45 μm针筒式微孔滤膜，进行HPLC分析，用外标法求得血浆中待测药物的浓度。

1.5数据分析处理采用美国Pharsight公司药动学软件 Winnonlin 6.1的非房室模型来处理药动数据，计算出每只试验鸡的药动学参数，然后计算平均值及标准差，同时以血药浓度平均值对时间作药-时曲线图。

2 结果与分析

2.1色谱条件适用性本研究建立的血浆中替米考星、磺胺二甲嘧啶样品处理方法和HPLC测定方法，磺胺二甲嘧啶、替米考星反式峰和顺式峰的色谱峰峰形分离良好，出峰时间分别为7.9、8.6和9.7 min左右，空白血浆无干扰（色谱图见图1和图2），表明本方法能够用于磺胺二甲嘧啶、替米考星在血浆中的测定。

图1 鸡空白血浆色谱图Fig.1 Chromatogram of blank plasma of chicken

图2 鸡空白血浆中添加制得含替米考星、磺胺二甲嘧啶标准品（0.5 μg/mL）色谱图Fig.2 Chromatogram of blank muscle spiked with 0.5 μg/mL tilmicosin and sulfadimidine

2.2标准曲线和线性范围血浆添加替米考星浓度在0.05～5 μg/mL范围内，线性关系良好，回归方程为y=69401x+236，相关系数r2=0.9991；血浆添加磺胺二甲嘧啶浓度在0.05～5 μg/mL范围内，线性关系良好，回归方程为y=62579x-900.5，相关系数r2=0.9995；若分析样品时，浓度不在此范围内，则稀释样品即可。

2.3回收率和精密度经本方法测定，在0.05、0.5和5 μg/mL 3个添加浓度下，血浆中替米考星的回收率为 82.38～108.75%，批内变异系数2.25%～4.33%，批间变异系数5.82%～8.49%，；血浆中磺胺二甲嘧啶的回收率为80.30～93.40%，批内变异系数2.29%～4.32%，批间变异系数5.25%～6.28%；该方法替米考星和磺胺二甲嘧啶检测限均为0.02 μg/mL，定量限均为0.05 μg/mL，表明该方法灵敏度高，能满足血浆中替米考星和磺胺二甲嘧啶检测需要。

2.4血药浓度及药动学参数健康鸡单剂量口服复方替米考星可溶性粉、肌注替米考星注射液和静注磺胺二甲嘧啶钠注射液后，不同时间血药浓度的实测值见表1，血浆药物浓度-时间曲线见图3和图4。采用药动学软件WinNonlin6.1的非房室模型统计矩分析方法对药物在鸡体内的药物动力学参数进行分析，得到药动学参数见表2。

由表2可知，主要药动学参数t1/2、Tmax、Cmax、AUC、MRT统计差异显著（P＜0.05）。

表1 3组健康鸡单剂量（20 mg/kg）给药后血浆中的药物浓度（n=12）Table1 Drug concentration of 3 groups after administration with 20 mg/kg(n=12)

表2 3组健康鸡单剂量(20 mg/kg)给药后的药代动力学参数(n=12)Table2 Pharmacokinetic parameters of 3 groups after administration with 20 mg/kg(n=12)

图3 鸡内服复方替米考星可溶性粉与肌注替米考星（20 mg/kg）后的血药浓度-时间曲线Fig.3 Drug concentration-time curve of compound tilmicosin soluble powder orally and tilmicosin intramuscularly to chickens

3 讨论与结论

3.1口服复方替米考星可溶性粉药动学特征健康鸡口服复方替米考星可溶性粉（20 mg/kg）后，磺胺二甲嘧啶钠的吸收较快，给药后2.25 h血药浓度达峰值（Cmax），为10.03 mg/mL，血浆中平均消除半衰期（t1/2）为1.38 h，曲线下面积（AUC）为37.17 μg· h·mL-1，平均滞留时间（MRT）为3.95 h，表观分布容积（Vz）为1.09 L/kg。健康鸡口服复方替米考星可溶性粉（20 mg/kg）后，替米考星吸收缓慢，给药后9.00 h，替米考星的血药浓度达峰值（Cmax），为1.43 mg/mL；血浆中平均消除半衰期（t1/2）为12.24 h，曲线下面积（AUC）为9.49 μg·h·mL-1，平均滞留时间（MRT）为11.75 h，表观分布容积（Vz）为35.00 L/kg。

图4 鸡内服复方替米考星可溶性粉与静注磺胺二甲嘧啶钠（20 mg/kg）后的血药浓度-时间曲线Fig.4 Drug concentration-time curve of compound tilmicosin soluble powder orally and sulfadimidine intravenously to chickens

3.2肌注替米考星注射液的药动学特征由于替米考星禁止静脉注射给药，故选择了肌注作为参考给药途径。肌注替米考星注射液（20 mg/kg）后，吸收迅速，肌内注射给药后0.50 h，血药浓度达峰值（Cmax），为2.33 mg/mL。血浆中平均消除半衰期（t1/2）为8.99 h；曲线下面积（AUC）为12.40 μg·h·mL-1，平均滞留时间（MRT）为10.69 h，表观分布容积（Vz）为20.56 L/kg。

3.3静注磺胺二甲嘧啶钠注射液的药动学特征静注磺胺二甲嘧啶钠注射液（20 mg/kg）后，吸收迅速，静脉注射给药后0.083 h，血药浓度达峰值（Cmax），为22.99 mg/mL。血浆中平均消除半衰期（t1/2）为1.26 h；曲线下面积（AUC）为61.31 μg·h· mL-1，平均滞留时间（MRT）为2.50 h，表观分布容积（Vz）为0.60 L/kg。

3.4复方替米考星可溶性粉与单用替米考星、磺胺二甲嘧啶钠注射液的药动学参数比较健康鸡口服复方替米考星可溶性粉24 h后，替米考星的平均血药浓度为0.12 mg/mL；给药后12 h，磺胺二甲嘧啶的平均血药浓度达0.38 mg/mL，24 h低于定量限。肌注替米考星后，在24 h平均血药浓度为0.10 mg/ mL。静注磺胺二甲嘧啶后，在8 h平均血药浓度为1.08 mg/mL，16 h后多数动物低于定量限。采用统计分析软件Excel 2003和SPSS 16.0分析药动学参数，复方替米考星可溶性粉和单方药物相比，药动学参数经t检验，t1/2、Tmax、Cmax、AUC、MRT等存在显著性差异（P＜0.05），表明复方替米考星可溶性粉单剂量口服给药吸收较慢，达峰时间显著延迟，平均驻留时间显著延长。

与单方相比，健康鸡口服复方替米考星可溶性粉（20 mg/kg）后，吸收表现一快一慢，达峰时间显著延迟，达峰浓度都显著低于单方制剂，在临床用药中能降低动物肝肾负担（替米考星属大环内酯类，属于时间依赖性型药物，血药浓度＞MIC的时间越长，抗菌效果越好[12]，太高的血药浓度导致浪费，反而增加动物的肝肾负担），减轻药物的毒副作用，尤其是替米考星对心肌的毒性作用；平均驻留时间较长，有效血药浓度维持时间延长，这在临床用药中能延长投药间隔，减少给药次数，降低动物应激反应[13]，这有利于两药抗菌作用的发挥；复方替米考星可溶性粉中替米考星相对于肌肉注射的替米考星的生物利用度为75.98%，复方制剂中磺胺二甲嘧啶钠的绝对生物利用度为60.63%，说明复方制剂中替米考星和磺胺二甲嘧啶钠吸收良好。

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《现代畜牧兽医》杂志征稿启事

一、杂志简介

《现代畜牧兽医》杂志是经国家新闻出版总署批准，由辽宁省畜牧兽医局主管，辽宁省畜牧兽医学会与辽宁省动物卫生监测预警中心联合主办，旨在打造全国一流的畜牧兽医学术性、指导性刊物。国际统一刊号：ISSN 1672-9692，国内统一刊号：CN 21-1515/S。本刊被中国知网、万方数据库、维普数据库等国内知名数据库全文收录。

二、征稿内容

本刊坚持学术性与技术性兼顾的原则，主要刊登内容涉及动物营养与饲料、动物遗传育种与繁殖、动物生理生化、基础兽医学、预防兽医学、临床兽医学、草业科学等方面前沿性研究成果、创新性理论研究及实用性技术报告。

三、稿件要求

1.本刊发稿以试验报告为主，要求方案设计合理，数据翔实可靠，结构完整清晰；少量刊发以国内外进展为主，高水平专题文献综述，以及较有深度的专题调研报告，所发稿件内容对畜牧兽医学术和实践具有显著的指导意义。

2.稿件字数以3 000～5 000字为宜。需按规范要求撰写中英文摘要、关键词、参考文献，引用文献在正文中准确标出。

3.基金项目应注明来源及编号，第一作者及通讯作者需提供简介（出生年、性别、学历、职务、职称、主要从事工作或研究方向）。

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Study of pharmacokinetics of Compound Tilmicosin Soluble Powder in healthy chickens

Wang Jiming1,Li Shuaipeng2,Huang Xianhui1*
(1.College of Veterinary Medicine，South China of Agricultural University，Guangdong Guangzhou 510642; 2.Inner Mongolia Jinhe Animal Phamaceutical CO.,LTD，Neimenggu Tuoketuo 010200)

The pharmacokinetics and relative bioavailability of Compound Tilmicosin Soluble Powder after oral administration、Tilmicosin injection after intramuscular administration and Salfadimidine injection after intravenous administration were investigated in chickens.36 chickens were divided to 3 groups randomly,and then received 20 mg/kg of Compound Tilmicosin Soluble Powder、Tilmicosin injection and Salfadimidine injection respectively.Blood samples were collected and analyzed by high-performance liquid chromatography(HPLC).Pharmacokinetics parameters were estimated by the WinNonlin6.1 software package and SPSS 16.0 analysis of the time and concentration data..The AUC of Compound Tilmicosin Soluble Powder、Tilmicosin injection and Salfadimidine injection were respectively 9.49±3.64,37.17±10.82,12.40±4.11 and 61.31±11.38 μg×h/mL.The relative bioavailability of Tilmicosin after oral administration was 75.98%,and the absolute bioavailability of Salfadimidine after oral administration was 60.63%.Comparing Compound Tilmicosin Soluble Powder with Tilmicosin injection and Salfadimidine injection,statistical analysis showed that the main pharmacokinetic parameters of t1/2、Tmax、Cmax、AUC and MRT were different significantly (P＜0.05).In conclusion,it appeared that Compound Tilmicosin Soluble Powder was absorbed slowlyand completely,and Tmaxwas significantly delayed,and MRT was significantly prolonged,which broadens their antibacterial spectrum and benefits their pharmacodynamics.

Compound Tilmicosin Soluble Powder;Salfadimidine;Pharmacokinetics;Bioavailability;Chicken

S859.796 < class="emphasis_bold"> 文献标识码：B

B

1672-9692(2016)06-0045-07

2016-04-13

王缉明（1985-），男，在校研究生。

黄显会（1969-），男，博士，高级兽医师。

公益性行业（农业）科研专项（201303038-5）。