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HPLC法测定羟乙磺酸喷他脒的含量

2016-12-28姜洪波

黑龙江医药科学 2016年6期
关键词:羟乙液相色谱仪磺酸

王 健,姜洪波

(1.新乡市食品药品检验所,河南 新乡 453000;2.新乡医学院第三附属医院营养科, 河南 新乡 453000)



HPLC法测定羟乙磺酸喷他脒的含量

王 健1,姜洪波2

(1.新乡市食品药品检验所,河南 新乡 453000;2.新乡医学院第三附属医院营养科, 河南 新乡 453000)

目的:建立高效液相色谱法测定羟乙磺酸喷他脒的含量的方法。方法:C18色谱柱,甲醇—醋酸铵溶液(30g/L醋酸铵水溶液,用三乙胺调pH为7.5)(50 :50),流速1.0mL/min,检测波长265nm。结果:羟乙磺酸喷他脒在9.98~99.66μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系。结论:测定方法简便,重现性好。

羟乙磺酸喷他脒;HPLC法;含量测定

羟乙磺酸喷他脒 别名: 戊烷脒、英文名:Pentamidine Isethionate 为无色结晶性粉末,无臭、味苦。可溶于水或甘油,微溶于乙醇,几乎不溶于氯仿、丙酮、乙醚。 药理和应用: 本品为芳香双脒类药物。本品作用机制尚不够清楚,可能干扰核苷酸生物合成和DNA的复制,也可干扰叶酸盐的转换。对利什曼原虫有直接杀灭作用。是治疗癌艾滋病并发卡氏肺孢子虫肺炎的首选药[1],是治疗黑热病的有效药物,但因其毒副作用较严重,故临床仅用于锑剂无效或对锑剂过敏等不宜用锑剂的患者。本品还可用于非洲锥虫病的早期治疗。本文采用HPLC法测定其含量,方法简便快捷,准确[2],重现性及稳定性好,测定结果满意。

1 仪器与试药

Waters2695高效液相色谱仪,2996PDA检测器,Empower数据处理软件。羟乙喷他脒对照品(SIGMA公司),色谱甲醇(天津四友),醋酸铵(分析纯)。供试品:羟乙磺酸喷他脒(河南龙泉药业) 。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱:C18(4.6×250mm);流动相:甲醇—醋酸铵溶液(30g/L醋酸铵水溶液,用三乙胺调pH为7.5)(50 :50),流速1mL/min;检测波长265nm;理论板数:7000。

图1 羟乙磺酸喷他脒对照品色谱图

2.2 线性关系考察[3]

精密称取干燥至恒重的羟乙磺酸喷他脒对照品适量,加流动相溶解并定量稀释成每1mL中含羟乙磺酸喷他脒9.98~9.66μg的溶液;分别精密量取上述溶液各10μL,注入液相色谱仪。

2.3 精密度实验[4]

精密称定羟乙磺酸喷他脒对照品适量于100mL容量瓶中,加流动相使其溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得(40μg/mL),作为供试品溶液;精密量取10μL,注入液相色谱仪。

2.4 回收率实验

精密量取0.08229g、0.10701g、0.12205g的羟乙磺酸喷他脒对照品各三份,分别置100mL容量瓶中,加流动相使其溶解,并稀释至刻度,摇匀。各精密吸取2mL于50mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀作为供试品溶液;另取0.10701g 的羟乙磺酸喷他脒对照品置100mL容量瓶中,加流动相使其溶解,并稀释至刻度。精密吸取2mL于50mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀作为对照品溶液。分别精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μL,注入液相色谱仪。

2.5 稳定性实验[5]

精密称定羟乙磺酸喷他脒对照品适量于100mL容量瓶中,加流动相使其溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得(40μg/mL), 作为供试品溶液。 在规定时间精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪, 进样三次测定。

2.6 样品含量测定

分别精密称取3批样品各两分,每份约0.1g于100mL量瓶中,加流动相40mL后使完全溶解,用流动相稀释至刻度,摇匀。移取此溶液2mL,用流动相稀释定容至50mL,摇匀,作为供试品溶液。精密量取10μL,注入液相色谱仪,进样两次,记录色谱图;另取干燥至恒重的羟乙磺酸喷他脒对照品两份。每份0.1g,同法测定。

3 实验结果

3.1 线性关系

按“2.2”实验方法,记录色谱图,量取峰面积,平行三次,结果取平均值,见表1。

表1 含量HPLC法线性考察结果

以浓度χ(μg/mL)对峰面积Y进行回归的线性方程为:у=28518χ-8787.4 г=1.0000

结果表明:本法在9.98~99.66μg/mL范围内呈良好的线性关系。

3.2 精密度实验

按“2.3”实验方法,记录色谱图,量取峰面积,平行测定6次,见表2。

表2 含量进样精密度测定结果

结果表明:进样精密度(RSD)小于2.0%,符合规定。

表3 回收率实验结果

样品NO.对照品加入量(g)峰面积回收率(%)对照品10.10701122509320.10701122529030.10701121549580%10.0822992656799.2320.0822992647499.2230.0822993312999.93100%40.107011216227100.1650.107011219776100.4560.107011221555100.60120%70.122051385016100.0180.12205138407699.9490.122051384900100.00

3.3 回收率实验

按“2.4”实验方法,记录色谱图,量取峰面积,求回收率,平均回收率=99.95% RSD=0.47%,见表3。

3.4 稳定性实验

按“2.5”实验方法,记录色谱图,峰面积取平均值,见表4。

表4 供试品溶液稳定性考察结果

峰面积RSD%为:0.13%,结果表明:本品溶液在8h内基本稳定。

3.5 样品含量测定

按“2.6”实验方法,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,含量结果(以羟乙磺酸喷他脒计),见表5。

表5 含量测定结果(%)

4 讨论

曾采用甲醇—水和乙腈—水按不同比例为流动相进行实验[6],结果色谱图峰形较差,经多次实验,流动相中加入一定量醋酸铵,并用三乙胺调pH到7.5,以甲醇—醋酸铵溶液(30g/L醋酸铵水溶液,用三乙胺调pH为7.5)(50 :50)为流动相结果峰形良好,理论板数高。通过上述试验表明,采用本文的HPLC法测定羟乙磺酸喷他脒的含量,方法简便,结果准确,重复性好,其专属性较好,可用于羟乙磺酸喷他脒的质量控制,为药品的注册申报提供依据。

[1]陈红. 喷他脒治疗卡氏肺孢子虫肺炎的最新见解[J].新药与临床,1990,9(5):309-310

[2]沈德凤,张启星,计莹,等. HPLC法测定止泻片中穿心莲内酯的含量 [J].黑龙江医药科学,2006,29(1):38

[3]王海英. 高效液相色谱法测定更昔洛韦凝胶的含量[J].黑龙江医药科学,2009,32(3):26

[4]王健. HPLC梯度法测定复方氯霉素咪康唑乳膏中氯霉素和硝酸咪康唑的含量 [J].黑龙江医药科学,2008,31(5):21-22

[5]王海英. HPLC法测定鼻炎糖浆中黄芩苷的含量 [J].黑龙江医药科学,2009,32(2):22

[6]丁立新,韩宁,高金波. 美沙拉嗪肠溶片质量标准研究[J].黑龙江医药科学,2007,30(2):24

王健(1980~)男,黑龙江佳木斯人,本科,双学士学位,主管药师。

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1008-0104(2016)06-0127-02

2016-07-12)

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