孙秀娥

(吉林工程技术师范学院,吉林 长春130052)

在常用的分析方法中,高效液相色谱法可分析游离氨基酸含量;毛细管区带电泳可得到产品的指纹图谱;液质联用可测出初步的相对分子质量信息;加热、烘烤、酸碱处理、萃取、接种微生物发酵等方法可以帮助推测产品中成分组成。细胞实验中同位素标记法可测脂肪生成增加率;微量减压技术可测产品促进豚鼠肝匀浆耗氧量,得到呼吸活性分析。

丁亚军,王莹等对小牛血清去蛋白提取物的药理、毒理作用进行研究,并将其主要成分和活性指标与爱维治比较。研究结果表明两药对比差异无显著性。

李爱菊,郑宏强,熊爱琴用异硫氰酸苯酯(Isothiocyanate,PITC)柱前衍生高效液相色谱法(HPLC法)测定小牛血清去蛋白提取物制剂中游离氨基酸。

任淑萍对小牛血清去蛋白注射液与小牛血去蛋白注射液有效成分含量和生物活性的比较研究,采用HPLC法进行鉴定分析,用Lowry法测定多肽含量,用瓦氏微量呼吸检压仪测定呼吸活力并计算刺激指数,测定两者对小鼠耐缺氧试验的不同影响时间,比较两者在主要成分、多肽含量、生物活性等方面的差异。赵宗阁,王尊文等在国内小牛血、小牛血清去蛋白提取物注射液质量分析及其抗缺氧作用研究中,采用Lowry法测定多肽含量,PITC作为衍生剂的高效液相色谱法测定游离总氨基酸,瓦氏呼吸实验测定其促进豚鼠肝匀浆呼吸活性,HPLC法鉴定双峰肽图。体外抗缺氧实验采用MTT比色法测定其对缺氧诱导神经细胞损伤保护作用。体内抗缺氧实验以小鼠常压耐缺氧时间评价其抗缺氧能力。

张荣立,王洪新等将小牛血清去蛋白提取物进行加热、加酸、加碱、烘烤、有机溶剂萃取、接种微生物发酵等方法处理,然后分别用微量呼吸检压法检测呼吸活性。并据此推测小牛血清去蛋白提取物中的活性物质可能是一种活性脂类。

虞惟俊对小牛血及血清去蛋白提取物注射液的质量控制方法研究,采用了反相高效液相色谱(Reverse phase high－performance liquid,RP－HPLC)、毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis,CZE)和液质联用(LC－MS)等分析方法。

任丽萍,虞惟俊等分别采用反相高效液相色谱(RP－HPLC)、毛细管区带电泳(CZE)、液质联用(LCMS)对小牛血清去蛋白提取物的特征图谱进行研究。

任丽萍,邓利娟等采用火焰原子吸收法测定小牛血去蛋白提取物浓溶液中的钠离子和钾离子,采用原子吸收分光光度法,以氯化铯为电离抑制剂,于589.3nm处对钠离子含量进行测定;在766.5nm波长处测定钾离子含量。

薛巧如,邓锋等通过超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪(UPLC/QTOF－MS)方法对小分子肽类及片段进行种属来源鉴定,并通过已有蛋白质库分析,对爱维治等15批样品中肽段进行鉴定和比较分析。采用ACQUITY UPLC液相色谱仪,BEH130 C182.1μm×1.7μm,150 mm 色谱柱,以0.1%甲酸溶液－0.1%甲酸乙腈溶液为流动相梯度洗脱,体积流量0.2m L/min,数据采集软件为Masslynx,数据处理软件为Protein Lynx。样品中找到牛源性肽段,部分样品有PEG污染。建立的UPLC/QTOF－MS方法可作为样品质量分析的一个参考。

董玲玉,杜宏明等在荧光共振能量转移探针检测药物中单磷酸腺苷的方法研究中,认为单磷酸腺苷(A-denosine monophosphate,AMP)是小牛血清去蛋白提取物的活性成份之一。研究发现AMP能够引起该探针在526nm处的荧光发射峰强度的猝灭并且AMP的浓度与探针的荧光强度的Stern－Volmer曲线呈现良好的线性关系,线性相关系数为0.996,该探针能够应用于药品中AMP的检测。研究证实小牛血清去蛋白提取物中已经确定存在的活性成份主要有肌醇、单磷酸腺苷、几种单糖,初步发现存在活性成份胆酸和神经鞘磷脂,目前研究在进一步明确药物成份。

[1]任淑萍.小牛血清去蛋白注射液与小牛血去蛋白注射液有效成分含量和生物活性的比较[J].中华神经医学杂志,2006,(08).

[2]张荣立,王洪新,杨菁等.小牛血清去蛋白提取物活性物质理化性质的实验研究[J].辽宁医学院学报,2007,(04).

[3]虞惟俊.小牛血及血清去蛋白提取物注射液的质量控制方法研究[D].上海：东华大学,2008.

[4]任丽萍,虞惟俊,廖海明等.采用 HPLC、CZE、LC/MS法对国内外小牛血及小牛血清去蛋白注射液的特征图谱分析[J].药物分析杂志,2009,(02).

[5]任丽萍,邓利娟,范慧红.火焰原子吸收法测定小牛血去蛋白提取物浓溶液中的钠离子和钾离子[J].药物分析杂志,2014,(04).

[6]薛巧如,邓锋,梁蔚阳.UPLC－QTOF质谱分析小牛血去蛋白提取物的多肽来源及组成[J].药物生物技术,2015,(02).

[7]董玲玉,杜宏明,王鹏等.荧光共振能量转移探针检测药物中单磷酸腺苷的方法研究[J].光谱学与光谱分析,2015,(11).

[8]国家食品药品监督管理局国家药品标准修订件[J].中国药品标准,2014,(01).