彭诚+杨康+张世莹

摘要：目的：本文通过正交设计优选地榆总鞣质的超声辅助提取工艺。方法：指标为地榆中总鞣质含量，经过单因素考察以及正交实验对超声辅助提取时间、溶剂浓度、超声辅助提取次数、乙醇溶剂用量四因素进行研究。结果：得到最佳提取工艺为超声波辅助提取3次，每次60分钟，溶剂为15倍量的料液比，浓度为70%的乙醇。结论：通过验证性实验，表明此方法提取工艺稳定可行。

关键词：地榆;总鞣质;正交设计;超声辅助提取

中图分类号：  R284.2                            文献标识码：  A                        DOI编号：   10.14025/j.cnki.jlny.2016.24.080

地榆中药材是以植物地榆根入药，最早载于《神农本草经》中。植物地榆（Sanguisorba officinalis L.）为蔷薇科地榆属植物，为多年生草本，又名猪人参、血箭草、马软枣[1]。地榆属植物大致分布于北温带周围区域，现如今在全世界发现的大概有30多种[2]。我国地榆属植物主要分布在东北、华北、西北、华东、中南及广西[3]。中药地榆其性微寒，酸、涩，味苦、归肝、大肠经。并且具有解毒敛疮，凉血止血之功效，故在中医临床使用上多用于治疗崩漏、血痢、便血、水火烫伤、胃出血、肠炎等病症[4]。地榆属植物中富含黄酮、皂苷、鞣质及甾体类成分。鞣质多具有抗肿瘤[5]、抗氧化[6]及降血脂及降血糖作用[7]等药理活性。本研究对地榆中主要的化学活性成分——鞣质提取工艺的优化，有利于地榆资源进一步的开发、利用，并为中药材有效成分的富集提供理论依据。

1 仪器、材料

1.1 仪器

UV-754型紫外—可见分光光度计（上海有一仪器有限公司），HJ-M4磁力搅拌水浴锅（金坛市城西春兰实验仪器厂），R-300旋转蒸发器（瑞士步琦），KQ-250B型超声波清洗器（昆山舒美超声仪器有限公司）。

1.2 材料

本药材采于吉林省二道乡水库，经过吉林大学药学院王广树教授鉴定，确定本品为药材地榆（Sanguisorba officinalis L.），没食子酸对照品150毫克 （经色谱分析，纯度>98%，济宁宏明化学试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1测定总鞣质含量[8]

2.1.1 没食子酸标准品溶液的配备 精密称定没食子酸标准品25毫克，置于50毫升棕色容量瓶中，加水稀释至刻度，量取10毫升，置于100毫升棕色容量瓶，加水再稀释至刻度，摇匀，放置备用（浓度为0.05毫克/毫升）。

2.1.2 线性关系考察 依次精确量取没食子酸标准品溶液，分别为1毫升、2.0毫升、4.0毫升、6.0毫升、8.0毫升、10.0毫升，再各自置于50毫升容量瓶中，每组均加磷钼钨酸2毫升，加水23毫升、22毫升、20毫升、18毫升、16毫升、14毫升稀释，加29%Na2CO3溶液至刻度后摇匀，放置30分钟，依照（《中国药典》2015年版第四部通则）所述，利用紫外可见分光光度法，在760纳米波长处测定吸光度A，并以吸光度A为纵坐标y，以浓度C为横坐标x，得回归方程y=59.427x+0.0268，r=0.9997。结果表明，没食子酸标准品（1.0～10.0μg/mL）浓度范围内线性关系较好。

2.1.3  供试品溶液 称取地榆浸膏适量，充分干燥，称重，置于500毫升容量瓶中，加水300毫升溶解，溶液过夜放置，超声波处理20分钟至充分溶解，于室温下静置冷却，加水稀释至刻度，摇匀静置并滤过，弃去初滤液100毫升，取续滤液20毫升移至200毫升容量瓶中，并加水稀释至容量瓶刻度，充分摇匀，得供试品溶液。

2.1.4  地榆总鞣质含量测定法 总酚：量取供试品溶液1毫升，置于50毫升容量瓶中，依“2.1.2项下”方法测定吸光度A，即得。

未被吸收的多酚：量取供试品溶液30毫升，加入150毫升具塞锥形瓶中，再加入干酪素0.9克，置于30℃水浴下保温1小时，时时振摇，取出之后放冷，摇匀后滤过，并弃初滤液，量取滤液4毫升，置于50毫升棕色容量瓶，依“2.1.2项下”方法测定吸光度， 地榆总鞣质的含量计算公式为：M鞣质得含量=M总酚含量-

M未被吸收的多酚含量

2.2 单因素考察

2.2.1 超声辅助提取的次数 取干燥的地榆根粉末适量，加入15B/V的60% C2H5OH，分别提取1、2、3、4、5次，每次60分钟。提取物经测定吸光度，计算含量结果提取次数对的总鞣质的提取量有一定差异，但3、4、5次差异不大，故而选定超声次数1、2、3次作为正交试验考察的因素水平，进一步考察超声辅助提取次数对提取工艺的影响。

2.2.2 超声辅助提取的时间 取干燥的地榆根粉末适量，加入15B/V的60% C2H5OH溶液，并依此超声提取20分钟、40分钟、60分钟、80分钟、100分钟。提取物经测定吸光度，计算含量结果表明20分钟到60分钟提取量逐渐上升，故而选定45分钟，60分钟，75分钟作为正交实验考察的因素水平，进一步考察超声辅助提取的时间对提取工艺的影响。

2.2.3 溶剂浓度 取干燥的地榆根粉末适量，分别加入15B/V的30%、40%、50%、60%、70%、80% C2H5OH，超声提取60分钟。提取物经测定吸光度，计算含量结果表明70%、60% C2H5OH提取结果最好，故而选定50%、60%、70% C2H5OH溶液作为正交实验考察的因素水平，进一步考察溶剂浓度对提取工艺的影响。

2.2.4 溶剂用量 取干燥的地榆根粉末适量，分别加入5、10、15、20、25、30B/V的60%C2H5OH，超声提取60分钟。提取物经测定吸光度，计算含量结果表明15B/V的60% C2H5OH提取结果最好，故而选择10、15、20B/V的溶剂用量，作为正交实验考察的因素水平，进一步考察溶剂用量对提取工艺的影响。

2.3  L9（34）正交试验设计

通过单因素实验的结果考察，选择超声辅助提取次数A、超声辅助提取时间B、溶剂浓度C、溶剂用量D为考察的四组因素，采用L9（34）正交试验设计方法，确定地榆中总鞣质的最佳提取工艺为A3C3B2D2，即为超声波辅助提取3次，每次60分钟，溶剂为15B/V的70%C2H5OH。通过显著性检验及方法分析，得出各因素对地榆中总鞣质提取效果影响的主次顺序为A>C>B>D。依照正交试验的结果重复试验5次，计算得RSD为1.74%。结果表明，按此最佳提取工艺操作，工艺稳定可行。

2.4 讨论

本文根据《中国药典》2015年版第四部通则，以没食子酸作为标准品考察线性关系，并得出地榆总鞣质含量。利用超声波辅助提取，通过多个单因素的考察，确定选取超声辅助提取次数（A）、超声辅助提取时间（B）、溶剂浓度（C）、溶剂用量（D）等影响因素的各自三个水平条件，利用正交试验设计，优化地榆中总鞣质的提取工艺，为超声提取3次，每次60分钟，溶剂为15B/V的70%C2H5OH。通过重复性考察，表明该结果的优化工艺稳定可行。

近些年，鞣质类成分在国内的研究的不断加深，地榆中总鞣质的生理活性受到了研究工作者广泛的关注。本文对地榆药材中总鞣质的提取工艺进行优化，有利于今后对地榆药材资源的开发利用，提高地榆总鞣质的提取效率，对生物活性成分的富集提供一定理论依据。

参考文献

[1] 路洪顺.地榆及其开发利用[J].中国林副特产，2000，（02）：50-52.

[2] 吴征锰.新华本草纲要（第三册）[M].上海：上海科学技术出版社，1990：130-131.

[3] 中药大辞海编写组编.中药大辞海（第一卷）[M]，北京：中国医药科学出版社，1993：1962-1963.

[4] 沈保安.中国常用中草药[M].合肥：安徽科学技术出版社，2005.

[5] 金哲雄，齐典.刺玫果鞣质预防肿瘤作用研究[J].中华中医药学刊，2007，25（04）：647-648.

[6] 曾伟成，蔡钦榕，杨辉，等.虎杖鞣质抗脂质过氧化作用研究[J]. 中药药理与临床，2002，18（06）：18-19.

[7] 姚思宇，赵鹏，刘荣珍，等.鞣质降血脂作用的动物实验研究[J].中国热带医学，2004，4（06）：45-946.

[8] 国家药典委员会.中国药典（四部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015： 通则203.

作者简介：彭诚，硕士，吉林农业科技学院，助教，研究方向：天然药物活性成分研究。